文档介绍：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术
SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳根据带电颗粒在电场中泳动的电荷效应,分子筛效应(聚丙烯酰胺凝胶为网状结构,具有分子筛效应)和浓缩效应来达到分离蛋白质和寡居核苷酸的目的。[1]
◇电荷效应:
蛋白质带负电荷,在电场中从阴极到阳极泳动。
阴极
阳极
◇分子筛效应:
聚丙烯酰胺凝胶为网状结构,具有分子筛效应。 SDS-PAGE仅根据蛋白质亚基分子量的不同就可以分开蛋白质。因为:
SDS是阴离子去污剂,作为变性剂和助溶试剂,它能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白质分子的二、三级结构。而强还原剂如巯基乙醇,二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后,分子被解聚成多肽链,解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束,所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量,这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。[2]
◇浓缩效应:
浓缩胶(堆积作用)
分离胶(分离作用)
凝胶浓度较小,孔径较大,把较稀的样品加在浓缩胶上,经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。,电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后,HCl解离成氯离子,甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。和蛋白质一起向正极移动,其中氯离子最快,甘氨酸根离子最慢,蛋白居中。电泳开始时氯离子泳动率最大,超过蛋白,因此在后面形成低电导区,而电场强度与低电导区成反比,因而产生较高的电场强度,使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动,形成以稳定的界面,使蛋白聚集在移动界面附近,浓缩成一中间层。[3] 最后经过分离胶分离开来。
[1] 西安市西部大学城陕西师范大学生物实验教学中心(710062)
[2] 百度百科
[3] 百度百科
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