文档介绍：肺腺癌论文:肺癌干细胞的分离、鉴定及耐药特性的初步研究
【中文摘要】非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)的发病率和死亡率居高不下,其中肿瘤细胞化疗耐药是导致治疗失败的主要原因之一。近年来,随着肿瘤干细胞(cancer stem cells, CSCs)研究的进展,越来越多的证据表明,肿瘤干细胞是恶性肿瘤发生、进展和复发的“根源”,其对化疗高耐药特性可能是导致肿瘤化疗失败的原因。肿瘤干细胞是肿瘤组织中存在着极少一部分具有自我更新、多向分化潜能和高致瘤性等干细胞样特性的细胞。至今,已在恶性胶质瘤、乳腺癌、白血病和肺癌等恶性肿瘤中分离出CSCs。研究已发现,众多肿瘤干细胞具有较分化后肿瘤细胞更高的天然耐药能力。如在胶质瘤干细胞中,高表达多药耐药相关蛋白1 (multi-drug resistance-associated protein、乳腺癌干细胞高表达腺苷三磷酸结合盒转运体G2(ABCG2)等。但迄今为止,人肺癌干细胞研究尚处于初级阶段,其耐药特性有待于全面、深入的研究。因此,本研究采用无血清培养法从肺腺癌A549细胞株中分离、鉴定肺癌干细胞后,探讨其有关的耐药生物学特性和机制,以期为肺癌干细胞的靶向治疗提供实验基础。;检测其干细胞标志物的表达;。材料和方法实验材料:肺腺癌A549细胞株由第三军医大学新桥医院全军呼吸病研究所提供;NOD /SCID免疫缺陷小鼠由第三军医大学新桥医院动物室提供,3~4周龄,此项实验均在第三军医大学新桥医院全军呼吸病研究所进行。实验方法::A549细胞:含10%胎牛血清的DMEM培养基,37
℃、饱和湿度下5%CO2的培养箱中进行传代培养;A549细胞球:DMEM/F12培养基(胰岛素4U/L+B27 1x+EGF20μg/L+ bFGF 20μg/L),37℃、饱和湿度下5%C02的培养箱中进行传代培养;;;、半数抑制浓度(IC50);、细胞周期;6. Western blot及免疫荧光检测GST-π蛋白的表达;7. RT-PCR检测MRP1、LRP基因的表达;8. NOD/SCID小鼠致瘤实验。,倒置相差显微镜下观察:大小不一的球状细胞团,悬浮于培养基中,细胞球由10至20个细胞组成,结构较致密而不易吹散,相差显微镜下透亮,折光性较强。。A549细胞球CD133的表达为(66±)%,A549细胞系CD133的表达为(±)%,n=3,P<。、CD44s干细胞标志物。: h, h,A549细胞球对顺铂(Cisplatin,DDP)和吉西他滨(Gemcitabine, GEM)的耐药性较其细胞系强,Cisplatin对A