文档介绍：菠萝蛋白酶的提取方法:沉淀法沉淀法是粗提酶蛋白的方法之一,主要用于前期酶的初步分离和浓缩,常用的方法有盐析法,有机溶剂沉淀法,聚乙二醇沉淀法,等电点沉淀法等。用新型吸附洗涤沉淀法和单宁沉淀法也可以提取菠萝蛋白酶,操作简单,产率也较高,但酶的产量与单宁的用量密切相关,而且所含单宁有毒,导致这种方法逐渐被淘汰了。以酒精为沉淀剂提取菠萝蛋白酶时,酒精的加入量会对菠萝蛋白酶产生较大的影响,酒精的浓度太低时,不能使菠萝蛋白酶沉淀下来,浓度太高容易使酶变性失活。酒精的浓度为80%时,酶的收率最高。从茶叶中提取的多酚类物质茶多酚也可用于菠萝蛋白酶的分离,%的茶多酚提取物对菠萝汁中菠萝蛋白酶进行沉淀最多可达78%,其最大沉淀率明显比单宁法高。(2)离子交换色谱法离子交换色谱层析法是蛋白质研究领域内比较高效的纯化技术,目前国外用于分离菠萝蛋白酶常用的离子交换剂有SephacrylS-200柱、MonoS阳离子交换剂、S-Sepharose、弱酸性阳离子交换树脂、CM-纤维素阳离子交换柱、Q阴离子交换柱。国内常用的有羧***纤维素(CMC)、二乙***乙基纤维素(DEAE),酶的纯化过程通常是将若干色谱纯化技术联合使用来实现的。Ota最早用SephadexG-75结合CM-SephadexC-25柱层析分离得到5种茎酶的组分。用DEAE-52离子交换柱层析结合SephadexG-75分子筛柱层析色谱法纯化果酶,。(3)固定化金属离子亲和色谱法固定化金属离子亲和色谱法是以普通凝胶作为载体,连接上合适的螯合配体和足够暴露的金属离子,制成亲和吸附剂,进行分离纯化蛋白质的方法。此法介于高特异性的生物亲和分离法和低特异性的离子交换色谱法之间,对组氨酸基团有特异性。HualiNie等(2008)首次应用固定化金属亲和膜(IMAM)—肽-尼龙膜,这是一种将七肽共价固定到复合膜上作为配体的新型尼龙膜,用其从菠萝中分离和提纯菠萝蛋白酶,,%,而且不会造成任何变性。固定化金属亲和层析技术正逐渐被采用,PawanGupta等(2007)将菠萝蛋白酶成功固定在亚氨基二乙酸载体琼脂糖凝胶6B型中。Cu2+与亚氨基二乙酸(IDA)的络合被用来作为螯合配体将单个组氨酸结合到菠萝酶上。固定化高亲和性载体的制备是试图将可溶性交联菠萝蛋白酶制剂固定到铜-亚氨基二乙酸-琼脂糖凝胶上。(4)超滤法超滤法是在离心力或较高的压力作用下,选择适当孔径的超滤膜,使水和其他小分子物质通过,而使所需酶蛋白截留的方法。利用超滤法提取酶蛋白,具有无相变、生物活性不易丧失、得率较高,不会改变溶液糖酸比等特点。用超滤法浓缩有机溶剂提取的菠萝蛋白酶产品质量好,对环境污染少,可以实现清洁生产,酶粉得率比高岭土工艺高出47%。,也比酒精沉淀法高。用超滤法浓缩提取菠萝蛋白酶需要对操作条件进行研究,尽最大可能提高超滤效果,促进工业化生产。杨辉等研究认为压力差在300kPa,透过液通量为50L/m2·h时即能保持较大的流量,又不会对酶活造成损失。在对菠萝汁进行超滤的过程中,料液透过通量随压力差增加和循环速度的增大逐渐上升并趋于稳定。用超滤法浓缩提取生物大分子时因不同膜材料的透过通量和截留率不同,而导致