文档介绍：实验二微生物接种技术一、目的微生物接种技术就是在灭菌条件下,用接种工具(针、环)从一支原菌种中挑取少许菌体,接入到另一支新的培养基上进扩大培养的技术。了解学****灭菌操作技术;掌握斜面接种技术。二、原理接种就是在灭菌条件下,用接种工具(针、环)(如图3-1)从一支原菌种中挑取少许菌体,接入到另一支新的培养基上进扩大培养的技术。接种就是在灭菌条件下,用接种工具(针、环)从一支原菌种中挑取少许菌体,接入到另一支新的培养基上进扩大培养的技术。我们要想得到大量的菌种,适应生产,科研和教学要求,就要进行微生物的接种,扩大菌种数量。接种因使用不同容器、不同的培养基,达到不同的目的,而有不同的接种方法,但是它们的基本要求是相同的。通常接种都应在空气经过消毒灭菌过的“接种室”、或接种箱或超净工作台内进行。三、材料、试剂与器具材料苏云金杆菌斜面菌种,牛肉膏蛋白胨斜面培养基。试剂75%酒精或1:50的新法尔天水溶液。超净工作台,接种针(环),接种工具(如图3-1)、酒精灯等。图3-1接种工具接种环;;;;、操作步骤(一),然后每立方米体积用5~10毫升福尔马林盛在容器中加热熏蒸或者是用1/10的福尔马林重量的高锰酸钾加到盛有福尔马林的容器中,不用加热,亦可进行熏蒸;也可用5%的石炭酸喷务灭菌;用紫外灯照射20~30min。也可达到灭菌的目的。应注意,要把接种时要所需的用具(如接种针(环),酒精灯等)及培养基放入接种箱(室)一起灭菌消毒,但是菌种不能放入,以免死。超净工作要预先通风,紫外线照射30min方可使用。,再用75%酒精或新洁尔灭擦两手,菌种试管表面同样要用酒精或新洁尔灭抹擦后才放入接种室(箱内)。(二)接种技术1、斜面菌种接种技术(从斜面培养基上的菌种接种至另一新的斜面培养基上的方法)。(1)准备工作就绪后,点然酒精灯。(2)将菌种和斜面培养基的两支试管用大拇指和其他四指握在左手中,使中指拉于两试管之间的部分,斜面向上,并使它们拉于水平位置,也可将试管放在左手掌中,用手指托住试管。(3)先将棉塞用右手拧转松动,便以接种时拔出。(4)右手拿接种环(拿的方法就和拿钢笔一样),在火焰上将环的部分烧红灭菌。环以上凡是在接种时可能进入试管的部分,均应用火烧过(如图3-2)。以下操作都要把试管口靠近火焰旁进行。(5)用右手小指、无名指和手掌拔掉棉塞(如图3-2)。(6)用火焰灼烧管口,灼烧时应不断转动试管口(靠手腕的动作,使试管口沾染的小量菌得以烧死)。(如图3-2)。(7)将烧过的接种针(环)触动没有长菌的培养基部分,使其冷却,以免烧死被接种的菌体,然后轻轻接触菌体,取出少许,慢慢将接种针(环)抽出试管(如图3-2)。(8)迅速将接种针(环)在火焰旁无菌区伸进另一试管,在培养基斜面上轻轻划线,在上面接细菌,划线时要由底部划到顶部,由上而上,划线可划之字形,或划几条直线,但都不要把培养基划破,也不要使菌种沾污管壁(如图3-2)。(9)将接种针(环)抽出,灼烧试管口,并在火焰旁将棉塞塞上。塞棉塞时,不要用试管去迎棉塞,以免试管在运动时纳入不洁空气(如图3-2)。(10)把针(环)在火焰上再灼红灭菌,放下接种钟(环)后,再腾出手来将塞塞紧。(如图3-2)。(11)