凝胶层析技术(凝胶过滤)..doc

文档介绍：3、样品的加入吸取1ml血红蛋白——核黄素混合液,加到凝胶床的表面上,不要沿柱壁加样品,注意加样时勿将床冲起。打开出口管,用少量水流一下,接触过样品的管壁,再加水扩展洗脱,用试管将洗脱液。4、洗脱:加去离子水洗脱,流速为每分钟1ml,两分钟收一管。5、比色测定:波长,红色部分520nm,黄色部分450nm绘制洗脱曲线:以光密度为纵座标,以时间为横座标,并标明洗脱峰的名称。6、凝胶的回收。四、凝胶层析的特点1、凝胶是一种不带电荷的惰性物质,本身不会与被分离物质相互作用,分离效果好,重复性高。2、设备简单,操作简便。五、影响凝胶层析的因素(一)凝胶的选择:(二)凝胶粒度对分离效果的影响40-60目为粗粒。100-200目为细粒(应用较多)能使洗脱曲线的峰区变得对称和狭窄。250-400目为最细粒。250-400(三)洗脱流速对分离效果的影响:一般采用流速在30-200ml/小时,过快会使色层谱变形。(四)离子强度和附值(五)样品液体积对分离效果的影响通常样品液体积约为凝胶床总体积的5-10%。(六)凝胶柱的长度,直径和分离效果的关系(七)Vo和Vi