文档介绍：血清清蛋白、γ球蛋白的分离、提纯与鉴定实验报告记录————————————————————————————————作者:————————————————————————————————日期: 生物化学实验报告姓名:学号:专业年级:组别:生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称(TitleofExperimetn)血清清蛋白、γ-球蛋白的分离、提纯与鉴定实验日期(DateofExperiment)2013-12-11实验地点(LabNo.)合作者(Partner)指导老师(Instructor)总分(TotalScore)教师签名(Signature)批改日期(Date)【实验报告第一部分(预****报告内容):①实验原理、②实验材料(包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材)、③实验步骤(包括实验流程、操作步骤和注意事项);评分(满分30分):XX】实验目的:1、掌握盐析法分离蛋白质的原理和基本方法2、掌握凝胶层析法分离蛋白质的原理和基本方法3、掌握离子交换层析法分离蛋白质的原理和基本方法4、掌握醋酸纤维素薄膜电泳法的原理和基本方法5、了解柱层析技术实验原理:1、蛋白质的分离和纯化是研究蛋白质化学及其生物学功能的重要手段。不同蛋白质的分子量、溶解度及等电点等都有所不同。利用这些性质的差别,可分离纯化各种蛋白质。盐析法:盐析法是在蛋白质溶液中,加入无机盐至一定浓度或达饱和状态,可使蛋白质在水中溶解度降低,从而分离出来。蛋白质溶液中加入中性盐后,由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质,致使蛋白质分子周围的水化膜减弱乃至消失。中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变,蛋白质表面的电荷大量被中和,更加导致蛋白质溶解度降低,蛋白质分子之间聚集而沉淀。离子交换层析:离子交换层析是指流动相中的离子和固定相上的离子进行可逆的交换,利用化合物的电荷性质及电荷量不同进行分离。醋酸纤维素薄膜电泳原理:血清中各种蛋白质的等电点不同,。,在电场中向正极移动。由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同,因而在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。因此可以将它们分离为清蛋白(Albumin)、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5条区带。实验材料:人混合血清葡聚糖凝胶(G-25)层析柱DEAE纤维离子交换层析柱饱和硫酸铵溶液醋酸铵缓冲溶液20%磺基水杨酸1%、电泳槽实验流程:盐析(粗分离)→葡聚糖凝胶层析(脱盐)→DEAE纤维素离子交换层析(纯化)→醋酸纤维素薄膜电泳(纯度鉴定)实验步骤:盐析+凝胶柱层析除盐:,,混匀室温放置10min,4000r/min离心10min上清液(含清蛋白、少量α球蛋白和β球蛋白)沉淀(含球蛋白)-25层析柱(×7cm)过葡聚糖凝胶G-25层析柱(×7cm),,,(2ml)洗脱,/LNH4AC缓冲液洗涤BaCl2检测SO 42-阴性BaCl2检测SO 42-阴性用2--(纯化):除盐后收集的球蛋白过DEAE-纤维素层析柱(×6cm),(3ml)洗脱,流出液量约1ml开始检测蛋白质取浓度最高的1管作纯度鉴定(醋酸纤维素薄膜电泳法)磺基水杨酸检测蛋白质收集含有蛋白质的洗脱液每管10滴,连续收集3管除盐后收集的清蛋白过DEAE-纤维素层析柱(×6cm)DEAE-纤维素柱不用再生,,,除去α球蛋白和β球蛋白磺基水杨酸检测蛋白质收集含有清蛋白的洗脱液每管10滴,连续收集2管DEAE--,