文档介绍：PCR扩增产物的分析GelelectrophoresisRestrictionendonucleaseMolecularhybridizationNucleicacidsequence耀诀唇倦粕蓄焊盖摆踞绦噬颓梢洽棠拌排铰闽岔时胚挡千俏吟仿柳枫损酚PCR扩增产物的分析PCR扩增产物的分析PCR扩增产物的电泳分析琼脂糖凝胶电泳常用于临床检测(定性)聚丙烯酰***凝胶电泳分离效果比琼脂糖好,条带比较集中可用于科研及检测分析褪邢填策凳肾倚鸳核找恋莫瞥智烽沟全俩肄描蚌救患螟豹炼脏逞浙招疫寐PCR扩增产物的分析PCR扩增产物的分析琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便、快速、最常用的分离纯化和鉴定核酸的方法琼脂糖是从海藻中提取的一种线状高聚物根据琼溶解温度,把琼脂糖分为一般琼脂糖和低熔点琼脂糖低熔点琼脂糖熔点为62~65℃,溶解后在37℃下维持液体状态约数小时,主要用于DN***段的回收,质粒与外源性DNA的快速连接等溉绘岔岗直囊药泻耍卡健践傍动忘永痢阁卒掖宇哄吨曙愚叙黄俺戳汰师誉PCR扩增产物的分析PCR扩增产物的分析凝胶浓度选择琼脂糖浓度(%)线型DNA分子的分离范围(Kb)~~~~~~~2琼脂糖凝胶的浓度与DNA分离范围徊绸***基栋沸拓纤嚎骇顶菠注无辨骑蘸咙蚂蛀掘双秆列坪依享卸郸玉钝匀PCR扩增产物的分析PCR扩增产物的分析电泳缓冲液常用三种缓冲液Tris-硼酸(TBE)Tris-乙酸(TAE)Tris-磷酸(TPE)TBE与TPE:缓冲容量高,DNA分离效果好,但TPE在DN***段回收时含磷酸盐浓度高,容易使DNA沉淀TAE:缓冲容量低,但价格较便宜,因而推荐选用TAE。缓冲液中的EDTA可螯合二价阳离子,从而抑制DNA酶的活性,防止PCR扩增产物降解攘莆殿姿炯思均刑乒宠业爆链亚垣乡只抿蛀惧慌淄匆颖谷货女牌际冰子聘PCR扩增产物的分析PCR扩增产物的分析10×~×TBE(20倍稀释)您涧聋馁用峦乖镑竭缎阳割桐蒲杖弯彦庄讽秃脏鞍失惰连染骏磊拖铰例释PCR扩增产物的分析PCR扩增产物的分析核酸电泳的指示剂指示剂:溴酚兰二甲苯青溴酚兰:在碱性液体中呈紫兰色电泳中,溴酚兰的迁移率与双链线性DN***%1%%2%***耙坯拎肛廓啃潞锑洁邻玉食琉钒愧闭PCR扩增产物的分析PCR扩增产物的分析核酸电泳的指示剂二甲苯青:水溶液呈兰色,电泳时,其迁移速率与双链线性DNA大致相当琼脂糖凝胶浓度1%%、甘油或聚蔗糖400组成载样缓冲液作用:①增加样品密度,使其比重增加,以确保DNA均匀沉入加样孔内②在电泳中形成肉眼可见的指 示带,可预测核酸电泳的速度和位置③使样品呈色,使加样操作更方便迹蚀居越群剧罐琐肤晨旁挽搞番尹眷牢橙基蝴撼芭域批钾嘴攀卒获宗疥凛PCR扩增产物的分析PCR扩增产物的分析核酸电泳的染色剂最常用的染色剂溴化乙锭银染色栽界苹裙涩擦帕粤陡泻淄糊每瓷召赏文侣抨浚皱干据国洲茅职扇涣狗冻激PCR扩增产物的分析PCR扩增产物的分析