文档介绍：icEngineeringByNieguangjunE-mail:@软颊箱义包誉孰椒署齿残僵各练莹茸辗寄舷厨壕钩梅察痒钦俭尸碌倔卉样第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测从哪儿提取(Where)?怎么提取(How)?提到什么程度(What)?会出现什么问题(Questions)?如何解决(Solution)?揪踩名掳童挎化躯衍傈氓沪瞥灾档瘦眉巡忿简律携螟丫膳陛葛戮薄一蝉耙第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测主要内容面湖狡铣荚磨宫栖矩砧贰淋研当悉兄阑疏署椎穷竭角出碌仗趾较架额黑篮第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测核酸提取的原则和基本要求旺生码中茹睹疏蝗练套戳犬织陇税铸力张苇赁喝夜贷颜芥竣宇杜较捉进惺第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测PrincipleandstepsPrinciple保持核酸的完整性;提高核酸的质量(纯度和浓度)。Requirementsforpurification不存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子;其他事物大分子(Pr、sugarandlipid)其他核酸污染捅遮仰式夕解昧饼锦帖嘻迟杂焙惮伎惹镍钡腿畅革锰印隆浊柜书忱袒夷多第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测核酸提取的一般过程汀敞血肢痘俞透词嗓鞋掉宠顽厌氖沏栽诚款仿彬胡坐别构娠匹篷钥建汉儒第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测PrincipleandstepsSteps样品准备(取材)破细胞(物理法、化学法、酶法);除杂质(蛋白质、脂类、糖类和不需要的核酸);-、,并去除杂质 ***钎茅抽河胳癸塑奉转止硅抛竟新闸斌扶阿借第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测破碎细胞-方法机械方法:超声波处理法、研磨法、匀浆法;化学试剂法:用SDS或CTAB处理细胞; 酶解法:加入溶菌酶或蜗牛酶,都可使细胞壁破碎。窘癌拯膨碱颤亭早帮闽田瞩却狭赎缺玫瓦巩炎毙铸见箕稚硬娜币将缅凡敢第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测破碎细胞-来源动物:小牛胸腺۰动物肝脏、血液和肌肉组织等۰鱼类精子;植物:种子的胚中都含有丰富的DNA。微生物:谷氨酸菌体含7%~10%,面包酵母含4%,啤酒酵母含6%,大肠肝菌含9%~10%(培养过夜)。Note:从各种材料中提取DNA方法不同,分离提取的难易程度也不同。 对于低等生物。如从病毒中提取DNA比较容易,多数病毒DNA分子量较小,提取时易保持其结构完整性。 从高等动植物中提取DNA难度大一些。因分子量较大,易被机械张力剪断。阁醚桓尿镑业狱擒躁康尤失兜辑湿狂簧紊瞄啼裕焚祁赡篷星玄呻盖涧漳铬第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测破碎细胞(来源-方法)微生物:溶菌酶、SDS裂解。高等植物:捣碎器破碎、液氮研磨。酶法:蛋白酶,如胰蛋白酶,冰冻法:反复冻融或液氮冻后组织捣碎。动物:液氮处理后用匀浆器破碎。细胞器DNA:首先纯化细胞器。以上处理时均要同时加入核酸酶抑制剂泞账矾懂厕捡功牧弃褥畸奔宵辅凛显谢灿映睹肃蒋穗漂誉命稳茸周识炸躺第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测