文档介绍：学位论文原创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外,不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体,均已在论文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。作者签名:日期:年月日学位论文使用授权声明本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档,允许论文被查阅和借阅;学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文;学校可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密的论文,按照保密的有关规定和程序处理。作者签名:导师签名:日期:年月日日期:年月日汕头大学医学院硕士学位论文I尸体肝组织时序性降解产物推断死亡时间的研究硕士研究生唐谷导师于晓军教授中文摘要背景死亡时间(Postmortem interval,PMI)推断一直是法医学研究和实践中的重点和难点课题,如何快速、准确、方便的推断PMI,对于死亡案件犯罪嫌疑人的排查、侦破,以及医疗纠纷和财产继承等司法审判,均具有重要意义。目前国内外学者已应用各种方法,力图实现准确、可靠和实用地推断PMI,但是,这些研究大多局限于单一尸体变化现象或单一物质的死后时序性变化的检测,尚未获得公认的可实际应用突破性进展。机体死后各器官组织细胞的新陈代谢停止,失去整体调控和局部代谢平衡的活体内外理化环境,细胞溶酶体的水解酶、胃肠道及消化腺的消化酶和消化液,以及体内腐败菌和体外昆虫等相互作用,形成了复杂的尸体内外理化环境,综合导致尸体组织发生自溶、腐败、风化的宏观时序性变化过程。其本质为组织细胞中结合的和游离的生物大分子持续性降解,及其混杂腐败微生物和嗜尸性昆虫的消化性代谢的生物化学反应过程,即蛋白质、核酸、脂类和碳水化合物等生物大分子-有机中分子-有机小分子-无机中分子-无机小分子-离子和元素的单向性降解或水解过程。这种生物尸体“回归自然”的降解代谢过程,存在着与活体生长代谢生化基本原理相应的“逆向反应”规律性。因此,基于高通量和超微量的生物组织代谢物定性定量检测和组群指标数据分析的代谢组学理论及技术,完全适用于研究尸体组织化学变化规律,及其时序性降解代谢路径中与PMI相关的物质组合图谱和标志物,既相对独立又相互重叠的最佳“窗口期”,用于从个体死亡开始至白骨化的尸体变化全程不间断精确推断PMI。本研究是在“利用组织生物力学性状时序性变化推断死亡时间”的前期实验中,发现尸体组织经过标准化定时、定位、定形、定量的取材之后,常规福尔马林溶液定比和定时固定的“六定”萃取液,肉眼观固定液的颜色和浑浊度呈时序性加深的规律,提示死后不同时间尸体组织自溶腐败的时序性产物,可被福尔马林溶液萃取,进而通过各种先进的物质理化定性定量仪器,进行与PMI相关代谢物的指纹图谱和代谢轮廓分析。因此,拟采用汕头大学医学院硕士学位论文II紫外-可见分光光度法(ultraviolet and visible spectropHotometry,UV-VIS)分析家猪及人尸体肝组织不同PMI“六定”固定-萃取液的色度、成分及其含量的变化,探讨肝组织自溶腐败过程的时序性量变和质变规律,筛选推断PMI最佳指标。目的1、建立恒温恒湿条件下家猪肝组织死后变化模型,标准化“六定”取材和常规福尔马林固定-萃取液,UV-VIS检测液体的色度、成分及其含量变化与PMI的相关性。2、随时获得已知死亡时间的人尸体肝组织检材,标准化“六定”取材不同PMI的检材,及其和固定-萃取液,结合死因和环境温度因素,初步探讨尸体组织代谢组学的理论和技术应用于实际人尸体,推断PMI的可行性。方法1、屠宰场健康成年家猪肝脏7例,放置温度25℃-湿度70(±5)%恒温箱保存,按照标准化“六定”取材方案:①定时,按0h、6h、12h、18h、24h、30h、36h、48h、60h、72h、84h、96h、108h、120h、132h、144h、156h时间点取材7例/组;②定位,肝右叶裸区中部,避开被膜、肝门及较大血管和胆管;③定量,每样本切取5g;④定型,肝组织成型阶段,切取近立方体状,以使其表面积基本均等;⑤定比,前“四定”取材样本,均按1:10质量-溶液比固定于10%蒸馏水-甲醛液(1:10配制),即10%福尔马林固定液50ml;⑥定期,同时以固定液兼萃取液放置72h后,单层滤纸过滤固定-萃取液40ml,即“六定”取材备用。2、深圳市公安局技术处法医检验中心2011年3月-7月明确PMI不同死因男性尸体23例,18~40周岁,均-5℃±3℃冰柜冰冻数小时~数月,室温解冻后,常规尸检取肝,室温保湿放置,按0h、6h、12h、18h、24h、30h、36h