文档介绍：山东师范大学硕士学位论文多***联苯的酶联免疫吸附分析姓名:杜瑞雪申请学位级别:硕士专业:环境科学指导教师:郭笃发;范仲学20090420山东师范大学硕士学位论文多***联苯的酶联免疫吸附分析中文摘要多***联苯(Polychlorinatedbiphenyls,PCBs)是联合国环境保护署要求逐步消除的持久性有机污染物之一,据世界卫生组织(WHO)统计,在全世界生产的工业PCBs约有2x107吨,其中排放到环境中的约占31%。PCBs作为一种环境污染物在世界范围内广泛分布,含量从ppt到几百个ppm不等。目前分析PCBs在环境中的含量最常用的方法是色谱法,这种方法需要复杂的样品前处理过程、精密的分离检测仪器、良好的实验环境和训练有素的操作人员,所以限制了其应用。与色谱法相比,酶联免疫吸附分析法(ELISA)样品前处理简单、灵敏度高、特异性强、成本低,并能应用于现场检测。因此,开展PCBs的酶联免疫吸附分析(ELIsA)方法的研究,具有重要的现实意义。多***联苯是联苯上的氢原子在不同程度上被***原子取代后生成的人工有机化合物的总称,共有209种同系物。本研究选取共面PCB77为多***联苯的代表物,对PCB77的酶联免疫吸附分析方法进行研究,选择具有活性基团和PCB77特异性结构的3,4一二***苯基乙酸作为半抗原,在低温和弱碱性条件下,***活性酯法将其与载体BSA偶联,制备PCB77的人工抗原,计算结合比为23:1,免疫家兔获得了PCB77的多克隆抗体。经琼脂双扩散和间接ELISA检测表明,其琼脂双扩散的结果在1:16以上,ELISA测得效价在1:20000以上,符合ELISA分析技术建立对抗血清效价的要求,。采用混合酸酐法将半抗原与OVA偶联,其结合比为8:1,用作EUSA检测包被原。本研究从固相包被条件的选择、最佳工作浓度的确定和基质条件的优化等方面初步得到间接ELISA分析方法的工作条件,并在优化条件下建立PCB77检测的间接ELISA方法,在绘制标准曲线中,抑制率与PCB77的浓度对数值呈显著的线性关系,其回归方程为Y=(x)+,可决系数R2=,~300ng/L之间,最低检测限ICl0=,初步鉴定抗体满足实验检测需要。采用间接ELISA法对PCB77的结构类似物进行交叉反应试验,当PCB77对抗原抗体反应的抑制率为50%时,,,%,,%,2,∥rnL,%j三***乙酸的浓度>8000ng/n=lL,交叉率<%。山东师范大学硕士学位论文以建立的ELISA检测方法对添加在土壤和水样中的样品进行回收,测定PCB77在土壤中的添加回收率为109~146%,~,在水样中的添加回收率为84%一98%,~。综合分析,本研究成功制备了PCB77的人工抗原,经动物免疫获得了高效价的抗血清,可用于建立PCB77的间接ELISA方法。经优化,建立了PCB77的标准曲线,与结构类似物的交叉反应不明显,可以用于含有PCB77的环境样品的初筛选,为研究和开发PCB77的ELISA试剂盒奠定了基础。关键词:半抗原;免疫原;多克隆抗体;抗体纯化;酶联免疫吸附分析中图分类号:X835山东师范大学硕士学位论文Enzyme—linkedImmunosorbentAssayforPolychlorinatedBiphenylsAbstractPolychlorinatedbiphenyls(PCBs),thereare2x07tPCBsfromindustryaroundtheworld,ofwhichabout30%,,·treatmentprocesses,sophisticateddetectionequipments,goodexperimentalenvironmentandwell—trainedoperators,parewithHPLC