文档介绍：附件2细菌回复突变试验BacterialReverseMutationAssay范围本规范确定了细菌回复突变试验的基本原则、要求和方法。本规范适用于化妆品原料及其产品的基因突变检测。(prototroph)。。。碱基置换有转换(transition)和颠换(transversion)两种形式。转换是DNA链上的一个嘧啶被另一嘧啶所替代,或一个嘌呤被另一嘌呤所代替。颠换是DNA链上的一个嘧啶被另一嘌呤所替代,或一个嘌呤被另一嘧啶所代替。。→原养型回复突变的试验方法。9经多***联苯(PCB混合物)或苯巴比妥钠和β-萘黄***结合诱导的大鼠制备肝匀浆,在9000g下离心10min后的肝匀浆上清液。3原理鼠伤寒沙门氏组氨酸营养缺陷型菌株不能合成组氨酸,故在缺乏组氨酸的培养基上,仅少数自发回复突变的细菌生长;大肠杆菌色氨酸营养缺陷型菌株不能合成色氨酸,故在缺乏色氨酸的培养基上,仅少数自发回复突变的细菌生长。假如有致突变物存在,则营养缺陷型的细菌回复突变成原养型,因而能生长形成菌落,据此判断受试物是否为致突变物。某些致突变物需要代谢活化后才能引起回复突变,故需加入经诱导剂诱导的大鼠肝制备的S49混合液。仪器和设备培养箱、恒温水浴、振荡水浴摇床、压力蒸汽消毒器、干热烤箱、低温冰箱(-80℃)或液氮15生物容器、普通冰箱、天平()、混匀振荡器、匀浆器、菌落计数器、低温高速离心机,玻璃器皿等。--:L-组氨酸(MW155)78mgD-生物素(MW244)122mgL-色氨酸(MW204)102mg加蒸馏水至1000ml配制:将上述成分加热,以溶解生物素,。贮于4℃冰箱。若试验中不使用大肠杆菌,则不添加色氨酸。:琼脂粉***化钠加蒸馏水至:上述成分混合后,。实验时,--。若试验中不使用大肠杆菌,则不添加色氨酸。-Bonner(V-B)培养基E成分:枸椽酸(C6H8O7·H2O)100g磷酸氢二钾(K2HPO4)500g磷酸氢铵钠(NaNH4HPO4·4H2O)175g硫酸镁(MgSO4·7H2O)10g加蒸馏水至1000mL配制:先将前三种成分加热溶解后,再将溶解的硫酸镁缓缓倒入容量瓶中,加蒸馏水至1000mL。。储于4℃冰箱。%葡萄糖溶液成分:葡萄糖200g加蒸馏水至1000mL配制:加少量蒸馏水加温溶解葡萄糖,再加蒸馏水至1000mL。。储于4℃冰箱。:琼脂粉-B培养基E20%葡萄糖溶液480mL10mL10mL配制:,再加入后两种成分,充分混匀倒底层平板。按每皿25mL制备平板,冷凝固化后倒置于37℃培养箱中24h,备用。:牛肉膏胨(K2HPO4):将上述成分混合后,。储于4℃冰箱。(+:***化钾(KCl)2)***化镁(MgCl2·6H2O)500mL配制:在水中溶解上述成分后,。储于4℃冰箱。()成分:磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)(Na2HPO4·12H2O)500mL配制:溶解上述成分后,