文档介绍：酶标仪在艾滋病检测中的应用Who(研究员或博士)?在我国艾滋病已经进入了快速增长期,疫情形势严峻,政府和社会各界对此高度重视,正在积极地投入大量人力、物力和财力进行地区疾病预防控制机构建设,并不断加大投入力度建全和完善艾滋病疫情监测网络,其中对艾滋病的检测是这些工作的基础。在我国经国家认证的筛查实验室使用的主要筛查方法是酶联免疫方法(ELISA)。自1971年Engvall等建立了检测可溶性物质的酶联免疫吸附实验和1972年Rubenstein等建立了均相酶免疫测定技术以来,酶联免疫检测方法进展很快,是目前我国在临床检验领域最主要的免疫检测技术由于酶联免疫检测是以底物显色作为反应的检测对象,因此作为微孔板比色测定分析仪器的酶标仪也就成为酶联免疫实验的重要工具,也是艾滋病检测必不可少的最基本检测设备。酶标仪的基本工作原理酶标仪是用来测定被检测物光密度(简称OD值)的精密分析设备。利用酶标仪进行酶联免疫检测的基本工作原理是朗比定理(Bouger-lambert-beer)。光是电磁波,波长100nm-400nm称为紫外光,400nm-750nm之间的光可被人眼观察到,更长的波长称为红外光。光通过被检测物,前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量,特定波长下,同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。检测单位用OD值表示,OD是opticaldensity(光密度)的缩写,表示被检测物吸收掉的光密度,OD=log(1/trans),其中trans为检测物的透光值。根据Bouger-lambert-beer法则,OD值与光强度成下述关系:OD=logI0/I,其中I0为在检测物之前的光强度,I为从被检测物出来的光强度。OD值由下述公式计算:E=OD=C×D×E其中:C为检测物的浓度,D为检测光从被检测物穿过的光径,E为摩尔因子。从上述公式中可以看到,对于同一物质在酶标孔中进行检测时,光径和摩尔因子都为常数,OD值与被检测物的浓度成正比。在临床酶联免疫检测实验中,对于定量检测,需要作出一个标准曲线,根据被检测物的OD值与其浓度成某种数学关系,可以在标准曲线上得到被检测物的浓度;对于定性检测,通过相应的质控品计算出来临界OD值,将被检测物的OD值同临界值来比较,可以得到被检测物的阴阳性结果。现在市场上国产和进口的酶标仪种类较多,但其基本功能不外乎是OD值测定,所不同的是测定波长范围、吸光度范围、光学系统、检测速度、温度控制、数据分析、结果打印、软件功能等方面的差异,下面分别做一简单介绍。一、测定波长:酶联免疫测定所使用的波长是400nm至750nm的可见光。每一种物质都有其特定的波长,在此波长下,此物质能够吸收最多的光能量。如果选择其它的波长就会造成结果的不准确,因此,在测定检测物时,我们选择特定的波长进行测量,称为测量波长。在临床实践中,各种试剂的操作多采用单波长测量。但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收,为消除这种非特异吸收,我们还可以选择一个参照波长,以消除这个不准确性。在参照波长下,检测光吸收就是非特异性的光,检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收,也即为双波长测定。图1:测定波长和参照波长示意图一般酶标仪的测定波长在400nm-750nm之间,完全可以满足酶联免疫的显色测定。目前国内常见的酶联免疫试剂盒中,使用TMB显色系统,测