文档介绍：:..液体一级母种的制备马铃薯20% % %%%KH2P041% MgSOJH?。0・05%VB,%按上述配制母种液体培养基,然后分装于500ml的三角瓶屮,每瓶装液200ml,用封口膜封口。在高压灭菌锅121°C下灭菌30mino冷却后接斜面试管菌种,。将接种后的三角瓶置于26°C恒温箱内培养两天,然后震荡培养(转速140r/min温度26°C),当接种后从第三天开始要经常检查是否冇杂菌污染。瓶内产生细小而稠密的菌丝球时终止培养,制的液体一级菌种。不同液体培养基配方的的制备葡萄糖3%玉米粉5%%,%%%木屑0%%木屑1%%1234按上述配制培养基每个配方处理重复3次,然后分装于500ml的三角瓶屮,每瓶装液200ml,用封口膜封口。在高压灭菌锅121°C下灭菌30mino冷却后每一•瓶中分别接种液体一级菌种15ml,将接种后的三角瓶置于26°C恒温培养箱(转速140r/min温度26°C),瓶内产生细小而稠密的菌丝球时终止培养。同理,按上述操作,将木屑分别改为杨树木屑和石榴树木屑,其余步骤相同。纤维素酶酶活测定:试剂:纤维素酶 -乙酸钠缓冲液 %CMC蒸憎水DNS 标准葡萄糖液lmg/ml配制试剂:1•DNS显色液:称取lOgDNS,溶入蒸憾水中,加入20g分析纯NaOH,200g酒石酸钾那,加水500ml,升温溶解后,加入重蒸酚2g,,加热搅拌,待全容后冷却,定容至1000mlo存于棕色瓶中,放置一周后使用。2•标准葡萄糖溶液:称取500干燥至恒重的葡萄糖lOOmg,溶解后定容至lOOmlo步骤:1•空白管:%CMC2•样品管:%CMC,lml酶液,混匀。与空白管同时置于50°C水浴锅中水浴30min取出,沸水浴10min,冷却后加入3mlDNS显色液,再沸水浴10min冷却后定容至25ml混匀,与标准曲线同时在550nmT测0D值。3•标准曲线绘制:取六支试管分别加入葡萄糖0、、、、,,各管加蒸憎水共lml,再分别加入去离子水lml,在分别加入DNS3ml,沸水浴10min,冷却后定容至25ml,550nm下测0D值。计算:三个样品管取平均值,纤维素酶活力(u/g)=rXDfX2X1000/V式中:r:通过0D550mn值从标准曲线上查得与标准葡萄糖溶液相对应的浓度(ug/ml)V:试验时移取得酶液的体积Df:稀释倍数(注:酶活力值保留3位)表一管试、\号剂123456葡萄糖标(ml)(ml)(ml)252525252525光密度0D550nm表二试试管剂空白管样品管1样品管2样品管3酶液(ml)1111CMC(ml)3333显色液(ml)3333定容后总体积(ml)25252525光密度0D550n