文档介绍：游离核酸微量DNA样本的检测近年来,DNA分析技术广泛应用于医学、法学、环境等诸多领域,成为科学研究的一大重点。例如产前诊断及法医检测等首先进行微量DNA提取,然后进行pcr扩增验证,也有一些研究单位会对一些古老样本进行DNA提取,同样做pcr扩增验证。它们的相同之处在于,用于分析的样本DNA含量可能极其有限,稍有遗损就可能导致无法成功检测或者没有足够的样本DNA来满足再次检测的需要。因此如何对获得的极其微量的DNA样本进行准确的定量,成为目前相关学科关注的热点之一。然而目前微量DNA的检测方法灵敏度都不是很高,一些国外的高端仪器虽然检测时DNA样本量很少,一般2μl左右,但是当DNA样本浓度低于10ng/μl时,其检测数据就会出现较大误差。而由此导致的pcr扩增失败,就会对DNA样本造成损失,甚至导致样本枯竭。因此开发一种经济、简便、快速的检测手段显得十分重要与迫切。北京百泰克生物技术有限公司开发的pgDetect微量核酸检测系统可以对浓度在1ng/ul以下的样本进行检测。pgDetect微量核酸检测系统其检测灵敏度为5pg/μl,D摄像机,有配套定量分析软件;两款仪器DNA样本用量仅需1-2μl。pgDetect微量核酸检测系统的检测原理:Picogreen染料是一种新型的dsDNA染料:其检测灵敏度高,可检测到pg级DNA;检测范围宽,可跨越4个数量级;特异性好,基本不受ssDNA和RNA的影响,并且可以耐受一定浓度的盐、尿素、乙醇、***仿、去垢剂、蛋白等干扰。目前使用Picogreen染料定量检测DNA已经广泛用于生物学检测,并被2010年版《中华人民共和国药典》选为药物残留DNA定量方法,本仪器的设计原理是通过在DNA溶液中加入Picogreen,使之发光,D相机捕捉光强度,最后用pgDetect软件进行浓度分析。其操作步骤如下:1准备试验样品及已知浓度的双链DNA,,一般双链DNA的终浓度在10-2000pg/μL的条件下,可以得到好的线性关系。将标准品稀释至浓度为:1600,800,400,200,100,50,25pg/μL及用于稀释标准品dsDNA的蒸馏水做空白对照,作为对标准品的浓度检测为例。3在透明管内进行操作,如可以使用PCR管或八连管等。将标准品与Picogreen核酸染料等体积混匀(如2μLdsDNA溶液与2μLPicogreen核酸染料混匀)此时标准品dsDNA的终浓度为800,400,200,100,50,25,,0pg/μL,同时取待测样品2μL与2μLPicogreen核酸染料混匀。试验操