文档介绍：葡萄糖激酶基因启动子-30位点PCR扩增的实验条件研究    【摘要】为确定PCR(聚合酶链反应)扩增葡萄糖激酶基因启动子区,对影响PCR的实验因素进行了系统研究。研究结果表明:;以1U 酶量效果最满意;最适dNTP浓度为167μmol/L;最适Mg2+。以上参数偏离最适条件将会导致实验失败。【关键词】聚合酶链反应  基因 扩增条件        聚合酶链反应(PCR)的开发是用来分析基因失调、恶性疾病和许多感染性疾病。为了避免由于不适合的反应条件导致的错误结果,在一种方法应用于临床常规实验之前要对影响反应结果的因素进行研究。本文就从白细胞中提取的基因组DNA作为模板,研究了应用PCR方法扩增葡萄糖激酶基因的最适实验条件,以便进而研究其与2型糖尿病发生的关系。现以正常人的基因为对象,报告如下。         1 材料和方法         材料        主要仪器:PE9600基因扩增仪;BIO-RAD Power Pac 3000型电泳仪;Mini-PROTEIN Ⅱ型电泳槽及Gel Doc 1000紫外图像分析系统;TJ-6型低温离心机;430 pH计;p10, p100微量加样器。主要试剂:5O D 260的寡核苷酸引物;100m m ol/L的dNTP;低熔点琼脂糖;5U/μl的Taq酶。         方法        模板的准备:本文使用的模板是从人体白细胞中应用酚/***仿/异戊醇提取的基因组DNA [1]。提取的模板用100μl TE缓冲液,60℃加热10-15分钟溶解后,-20℃冰冻保存。        目的片段的扩增:寡核苷酸引物根据文献报道设计:上游引物为5’-ATG-3’,下游引物为5’--3’,扩增片段长度为258个碱基。反应体系中模板1μl,10×缓冲液3μl,加双蒸水至30μl条件不变,分别变化Taq酶、dNTP、引物、Mg 2+的浓度,按94℃预变性5min,后94℃1min,60℃1min,72℃1min进行35个循环,最后72℃延伸5min。用2%琼脂糖凝胶电泳,透射式紫外灯下观察扩增产