文档介绍：[doc],李友训2,孟春晓,(,山东青岛266071:赵方庆2,杨庆利,,北京l0o039)摘要;为了筛选雨生红球藻虾青素合成过程中的关键酶基因的反式调节因子基因,,并分离纯化了mRNA,经过反转录后的得到cDNA,构建了以-,×10,重组率为100%.用PCR方法对文库的质量进行了鉴定,:雨生红球藻;cDNA表达文库;构建中图分类号::A文章编号:1001—6392(2006)020093—04雨生红球藻(USpluvialis)是一种单细胞的绿藻,在环境胁迫下能够在细胞内迅速积累虾青素,,具有超强的抗氧化活性,能够提高动物的免疫力,抑制肿瘤,,不仅可以用作水产养殖的饵料添加剂,人的食品添加剂,在药品,,,我们构建了cDNA表达文库,,,,~(Catalog#200451).T3primer,:2005—03—:2005—06—16基金项目:国家自然科学基金项目(30470156).中国科学院创新项目(KT__~X3一SW一215),收集藻细胞约1g,用液氮研磨成粉末状,%.?根据mRNA占总RNA的l%一5%,取适当的总RNA用Oligotex分离mRNA,将分离的mRNA保存在-70?,2链,,每一滴收集到一个管中,共收集15滴,%(共约500L)-gal,培养过夜后计算白斑/(白斑+蓝斑)=噬菌斑数目×稀释倍数×loo/所涂噬菌液的体积(L),,在保存缓冲液中滴入一滴氯仿,剧烈振荡30S,,用T3primer和T7primer作为扩增引物,:94?预变性5min,94?lmin,48~Clmin,72?2min,30个循环,72?保温10m