文档介绍：为什么pcr扩增得到的目的基因不能直接用于连接反应2009-04-1822:30wanglan099 等2人 | 分类:生物学 | 浏览1101次分享到:2009-04-1822:36网友采纳johnny王子 | 六级因为有很多杂带不纯,需要先纯化连接T载体测序,还有就是PCR之后两头都带有a碱基,这就是为社么能直接连接T载体的原因,评论 | 1 0其他类似问题l2011-03-21PCR技术扩增目的基因的过程需不需要ATP?为什么? 34l2010-11-11pcr没把目的基因扩增是什么原因 2l2009-05-16为什么PCR方法扩增目的基因不用解旋酶 10l2009-05-31PCR扩增目的基因时为什么要冷却 4l2010-04-30为什么“利用PCR技术扩增目的基因”是获取目的基因的步骤?( 16更多关于PCR中扩增效率太低是怎么回事的问题>>按默认排序 | 按时间排序其他7条回答2010-10-2421:21jinrongyu613   | 十四级原因很多,引物没有设计好,模板浓度过低等等[提问者采纳] | 评论 | 1 02009-04-2018:30热心网友因为PCR产物不一定带有连接需要的粘性末端~~~评论 | 0 02009-04-2509:42wenkop301 | 三级不同的反应是在不同的缓冲反应体系下进行,所以分子实验的一个原则是,在进行下步实验时,要经可能将上步实验中残留的缓冲体系去除干净,否则残留的缓冲体系将会影响后续反应体系的缓冲能力,干扰后续实验。补充一下。是否产物为粘性末端和平末端并不重要,因为对于两种产物都有不同的载体进行连接。评论 | 2 02009-04-2511:31 | 四级谁说不可以?我一直嫌回收纯化目的条带麻烦,所以我一直用PCR产物连接T载体,没问题评论 | 2 02010-10-2509:55songbocui66 | ,可能会出现引物二聚体,不能同模板结合,也就扩增不出基因片段。,温度太高影响引物同模板结合效果。,但这个条件不是影响PCR反应的决定性因素。。评论 | 0 02010-10-2714:33olivia2010lm | ::温度,时间的选择。酶、稀释液的浓度等等评论 | 0 02010-11-0223:43wen1heng | 三级PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及,④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板:①模板中含有杂蛋白质,②模板中含有Taq酶抑制剂,③模板中蛋白质没有消化除净,特别是染色体中的组蛋白,④在提取制备模板时丢失过多,或吸入酚。⑤模板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时,不出现扩增带,极有可能是标本的消化处理,模板核酸提取过程出了毛病,因而要配制有效而稳定的消化处理液,其程序亦应固定不宜随意更改。酶失活:需更换新酶,或新旧两种酶同时使用,以分析是否因酶的活性丧失或不够而导致假阴性。需注意的是有时忘加Taq酶或溴乙锭。引物:引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称,是PCR失败或扩增条带不理想、容易弥散的