文档介绍：--------------------------校验:_____________-----------------------日期:_____________实验一--微生物培养基的制备与灭菌实验一微生物培养基的制备与灭菌(8课时)一、目的要求1、学****配制微生物培养基的一般方法和步骤。2、掌握高压蒸汽灭菌的原理和操作方法。二、基本原理正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。由于微生物种类及代谢类型的多样性,因而用于培养微生物的培养基的种类也很多,它们的配方及配制方法虽各有差异,但一般培养基的配制程序却大致相同,例如器皿的准备,培养基的配制与分装,棉塞的制作,培养基的灭菌,斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相同。三、实验材料1、药品:牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂粉、1mol/L的NaOH和1mol/LHCl溶液。2、仪器及玻璃器皿:电子天平、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、酒精灯、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿和玻璃棒等。3、其他物品:药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花、报纸、线绳和注射器等。四、操作步骤(一)玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须用洗涤剂洗刷干净,然后用自来水冲净,置于烘箱中烘干后备用。(二)牛肉膏蛋白胨培养基的配制1、培养基配制(1)称量:按培养基配方计算出各成分的用量,然后用电子天平进行准确称量后倒入一烧杯中。注意:称量药品时,一定要用称量纸而不能用滤纸。称药品用的药匙不要混用,称完药品应及时盖紧瓶盖。(2)溶解:用量筒称量所需体积的水(根据实验需要可用自来水或蒸馏水),倒入烧杯中,用玻璃棒搅动溶解即可。(3)调pH:一般用pH试纸测定培养基的pH,可用1mol/LNaOH或1mol/LHCl溶液进行调节。调节pH时,应逐滴加入NaOH或HCI溶液,防止局部过酸或过碱,破坏培养基中成分。边加边搅拌,并不时用PH试纸测试,直至达到所需pH为止。注意:pH值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子的浓度。2、制备液体培养基(1)用量筒准确量取20ml培养基,倒入100ml三角瓶中,塞好棉塞,用报纸包好瓶口并用棉线包扎好,灭菌。注意:倒溶液时不要把瓶口沾湿。包扎时不要把瓶子弄倒而把棉塞弄湿。3、制备固体培养基(1)平板培养基A、用量筒准确量取100ml培养基,倒入250ml三角瓶中,加入2g琼脂粉,塞好棉塞,用报纸包好瓶口并用棉线包扎好,灭菌。B、将洗净烘干的培养皿用报纸包扎好,灭菌。C、在超净工作台中,将装在三角瓶中已灭菌的琼脂培养基冷至50℃左右倾入无菌培养皿中。温度过高时,皿盖上的冷凝水太多;温度低于50℃,培养基易于凝固而无法制作平板。平板的制作应在火旁进行,左手拿培养皿,右手拿三角瓶的底部,左手同时用小指和手掌将棉塞打开,灼烧瓶口,用左手大拇指将培养皿盖打开,倾入10-15ml培养基,迅速盖好皿盖,置于桌上,轻轻旋转平皿,使培养基均匀分布于整个平皿中,冷凝后即成平板。(2)斜面培养基A、用量筒量取100ml培养基,倒入一个烧杯中,加入2g琼脂粉,置于石棉网上加热,用玻璃棒搅动溶解至琼脂粉溶解。B、将洗净烘干的试管放置在试管架上,用注射器将融化琼脂粉的培养基倒入试管至试管高度的1/4处。注意:不要将试管口弄脏。C、待培养基冷却凝固后,塞上棉塞,以2支或4支为一组,用报纸将试管口包扎好,灭菌。