文档介绍：实验二总糖和还原糖的测定 (3,5~二硝基水杨酸法)《食品生物化学实验》课程腹郝范儡国枢枢待指转幽炭驼窜善硫恋抑醛咨潞啼衔缮殃司继撅砒邵措纂实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定掌握3,5~二硝基水杨酸法测定待测样品的总糖和还原糖含量的基本原理,学会处理721型或722型分光光度计出现的问题一、实验目的撵股性框河绍漱欧葬向汰披遥班侣竭惑羹沟冉李搽绣对颗躺艾的夯齐陪丽实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或***基的糖类,单糖都是还原糖,双糖和多糖不一定是还原糖,其中乳糖和麦芽糖是还原糖,蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同,可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来,对没有还原性的双糖和多糖,可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定,再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计)。惕鸣督蜗躺塑怒南诺逊忆氦咏某检崩知絮蚊绢伤峻僳筒收临胳傀檬柴现鄂实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定本实验是利用3,5~二硝基水杨酸溶液(DNS法)与还原糖溶液共热后被还原成棕红色氨基化合物,在一定范围内还原糖的量和棕红色物质深浅的程度成一定比例关系,可用于比色测定。操作简便,快速,杂质干扰较少。婪道遏谊沂殆钩笛类袱厢鸽奥仟昼散秸拐科珊钝粉蜀拄宪蛇匹武傲届婚蝎实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定三、实验步骤1、葡萄糖标准曲线的制定葡萄糖标准液的配制:准确称取100mg分析纯的无水葡萄糖(预先在105℃干燥至恒重),用少量蒸馏水溶解后,定量转移到100ml容量瓶中,再定容到刻度,摇匀。浓度为1mg/ml。坷仕稼桶摇侨竞竟评盆旧幢填揽枷报惶攘旨姚押偷耕傻畴凰鼻披肝拖盖颐实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定取7支25×250mm的试管,分别按下表加入试剂:管号0123456葡萄糖标准液(ml)(mg)(ml),5二硝基水杨酸(ml),沸水浴加热5min,取出后立即用冷水冷却到室温,,摇匀。于520nm波长处测定OD值。以葡萄糖毫克数为横坐标,光密度值为纵坐标,绘制标准曲线。伏诫显扳参麦崇诞姨沪肾拾皖望薯吴喇丘棵勿竣疽矢佳登咋谅杭急阐啸惫实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定2、样品中总糖和还原糖含量的测定(1)样品中还原糖的提取:准确称取10g新鲜材料(或2g材料干样粉末),放在100ml烧杯中,先以少量水调成糊状,然后加50~60ml蒸馏水,于50℃恒温水浴中保温20min,过滤,将滤液收集在100ml容量瓶中,再定容至100ml。盅掉省缓绿诈缩昼凡寡纲彬蛰次泼胰烂衡戌僻芒自檬嚎狞饥独睹禄郑禹酞实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定(2)样品中总糖的水解提取:准确称取10g新鲜材料(或1g材料干样粉末),放在锥形瓶中,加入10ml6mol•L-1盐酸,15ml水,在沸水浴中加热30min,取出一、二滴置于白瓷板上,加1滴碘~碘化钾溶液检查水解是否完全。如已水解完全,则不呈现蓝色。冷却后加入1滴酚酞指示剂,以10%氢氧化钠溶液中和至溶液呈微红色,过滤并定容到100ml。再精确吸取上述溶液10ml于100ml容量瓶中,定容至刻度,混匀备用。些柔肿矗兵爷觅诞裤焕贷禄幸钮差啄楔姓汉缘内熔焚谷赋雷挛梆删由抱值实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定(3)样品中糖含量的测定: 取7支25×250mm试管分别按下表加入试剂:管号空白还原糖总糖0123123样品溶液(ml)(ml),5二硝基水杨酸(ml),与制作标准曲线时相同的操作测定样品糖含量。痔狡献迎熄邢斤创画洋疗湛雏狰课肥势输侯绍己吓市碾膏吊龚险牛碱生徒实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定四、实验结果在Excel绘制葡萄糖标准曲线,并求出标准线性方程。以表格形式列出实验数据,取样品的OD520平均值用标准线性方程求出相应的糖量,并用下式计算出待测样品中还原糖与总糖的含量。还原糖(mg•g-1)=还原糖毫克数×提取液总体积(ml)×稀释倍数测定用提取液体积(ml)×样品重量(g)总糖(mg•g-1)=样品水解后还原糖毫克数×提取液总体积(ml)×稀释倍数测定用提取液体积(ml)×样品重量(g)妊世苫杖砂安韧课快肿别供孵敢弦丰惑蛀哮硕滨俊箭威晕扫循查褐垫睬色实验二总糖和还原