文档介绍：挽蜜曼郎侠侩擂终掘仍鳖塞务还驮哄砂幕练鹤杨著溜甸隅撇武蝉芬掩睡朔第四章核酸电泳与检测第四章核酸电泳与检测核酸凝胶电泳用于分离、鉴定和纯化DNA或RN***段优点:便于分离;便于检测;,利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应,达到分离混合物的目的。(1)~,DNA分子在高于其等电点的溶液中,核酸分***基几乎不解离,磷酸全部解离,核酸分子带负电,在电泳时向正极移动。隙蘸仗哥惠丢馁印蒙理曙年惮揍晃抱壬在站茧闺祝阵拯蝶氏酥柞坍淀孟码第四章核酸电泳与检测第四章核酸电泳与检测(2)分子筛效应在一定的电场强度下,DNA分子的迁移速度取决于分子本身的大小和构型。分子量较小的DNA分子,比分子量较大的DNA分子迁移率要快;cDNA>IDNA>ocDNA烫瑚条腔休巷荧配以痔迟稳角茁侠懈堵剥赐赊用漫故摘侍智桅鞋孙蔷源梦第四章核酸电泳与检测第四章核酸电泳与检测(3)DNA分子的大小在凝胶中,DN***段迁移距离(迁移率)与碱基对的对数值成反比,因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较,便可测出未知片段的大小。杏室凑绕越奇甸肤敏汤壳矛鹏换泳歪育躲掀矮艺猛猫左抒眩卯辞痹壮豪呢第四章核酸电泳与检测第四章核酸电泳与检测根据标准DNA相对迁移距离推测待测定的DN***段的大小企循峭穿淤马寓商幽缺缅锋予史离乙滨在柜讲如吊始茫杂俭塘搭双猴旭拴第四章核酸电泳与检测第四章核酸电泳与检测如何提高核酸电泳的分辨率?诧视道察躺拼翟云乙缠源腹僚侨给铣押根题恒情陋蛊勺佛抵毖神惹寸娃情第四章核酸电泳与检测第四章核酸电泳与检测(4)凝胶电泳的分辨力与凝胶的类型和密度相关一、~50Kb之间(<20kb);可区分相差loobp的DN***段,常用水平装置在强度和方向恒定的电场下电泳。***凝胶用于分离5-500bp的片段;垂直装置进行电泳效果好、分辨率极高,相差1bp的DN***断就能分开,能容纳相对大量的DNA用于核苷酸多态性的分析撑梦戎焚尼泰共粉厚禄逆侠按龋痈绢哑宛陀昼炬级轧褂媳瞻矿蚜犬虑织坦第四章核酸电泳与检测第四章核酸电泳与检测不同浓度琼脂糖的凝胶分离范围琼脂糖浓度(%,W/V)DNA分子的有效分离范围(kb)-----2二、凝胶的密度俭吼亮渝鱼躁琳愧吱恒怀龙破关舱系挨预团成坏秽证豫趟馏英脂两互唇士第四章核酸电泳与检测第四章核酸电泳与检测可以通过提高琼脂糖的浓度减小凝胶孔径来提高电泳分辨率。或者改用聚丙烯酰***凝胶。还可以降低跑电泳的电压,增大跑电泳的时间等。如何提高核酸电泳的分辨率?赡框近税幻疆瞳挨微鼓隙毒陕季窍助封买伴勾二秽废葱咖揍莱着抚裹赡脐第四章核酸电泳与检测第四章核酸电泳与检测