文档介绍：第六章分子生物学研究法(下)——基因功能研究技术原位杂交insituhybridization,ISH原位杂交(ISH)是用标记的核酸探针,经放射自显影或非放射检测体系,在组织、细胞、(Insituhybridization) 1)同位素原位杂交(Isotopicinsituhybridization) ——70年代 2)非同位素原位杂交(Non-isotopicinsituhybridization) ——80年代中后期 (1)免疫酶联 (2)荧光原位杂交(Fluorescenceinsituhybridization,FISH) **同位素原位杂交的不足之处: 1)不稳定; 2)高背景; 3)曝光时间长; 4)结果统计学处理繁琐。5)同位素的使用和处理荧光原位杂交原理(FluorescenceInSituHybridization,FISH) 用荧光染料标记的DNA或RNA探针与细胞中的DNA或RNA杂交,洗脱未结合的探针后,在荧光显微镜下对杂交信号的大小、数目、定位和分布等进行分析,如下图:**FISH的特点: 1)快速;2)信号强;3)特异性高;4)多色。染色体复染的物质: PropidiumIodide(PI)(红色)DAPI(兰色)quinacrine(绿色)chromomycineA3(绿色)荧光原位杂交检测人染色体的完整性,所有的染色体都具有着丝粒(绿色)、所有的染色体长和短臂末端都有端粒(红色)存在人类染色体DN***段荧光标记探针LSI(LocusSpecificIdentifier)CEP(ChromosomeEnumerationProbe)TelVysion(TelosomeDetection)WCP(WholeChromosomePainting)FISH技术的应用1)基因(或DN***段)的染色体定位; 2)染色体数目与结构异常的检测;