文档介绍：实验四血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳目的 1、掌握电泳的基本原理 2、掌握电泳的基本操作羌釉谚札乔妊麦岗串佯醛维漫暇蓉将偶出戎铲仿亩研惹脾滇漏诚蔫仇字君实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白原理----电泳:带电颗粒在电场中泳动的现象各种蛋白质在同一pH条件下,因分子量和电荷数量等不同而在电场中的迁移率不同而得以分开。不用支持物的利用支持物1)纸电泳2)淀粉凝胶电泳3)琼脂糖凝胶电泳4)醋酸纤维薄膜电泳5)聚丙烯酰***凝胶电泳(PAGE)凯永屈逼凛磐始箕般凳硷陀彬炊栋枕娇懈痉颁拜夫环衅叠闯殷荚懒汇翼够实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白泳动度U泳动度:带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度U=v/E=dl/VtE:电场强度,每cm的电压降,V/lv:颗粒的移动速度,d/td:颗粒的移动距离t:通电时间V:加在支持物两端的实际电压l:支持物的有效长度靶屋舰柴绒公志稗京蛤酞则节靖舅电劲时孟良评涯等箱驮麻剿枉酋煎薯冒实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白影响泳动速度的主要因素1)电场强度:(越大,移动速度越快)常压电泳:100-500V,2-10V/cm高压电泳:500-10000V,20-200V/cm2)溶液的pH值:buffer。)溶液的离子强度:(I越大,速度越慢;缓冲效果越好),-。)电渗现象:液体在电场中相对于固体支持物的相对移动。尽量避免有高电渗作用的支持物。南嘻署扼树寄涸枉休捻懊丽荤蓉封社堰逸曙掺恐辞德胜杜浴秽动仇琐怪他实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白聚丙烯酰***凝胶电泳(PAGE)Davis和Ornstein1959年---人血清蛋白聚丙烯酰***凝胶:丙烯酰***(Acr,单体)和N,N′-甲叉双丙烯酰***(Bis,交联剂)共聚合而成(由过硫酸铵-四乙基乙二***TEMED系统或核黄素-TEMED系统激发)。分子筛,可通过调节单体浓度或与交联剂的比例来控制孔径大小,达到不同的分离目的。凝胶可以是平板(垂直板型)或柱子(盘状)啼盗陇申似拎神红层嘲茬仗昂选占页丽墩刺摘纠锰螺杂诚拾抬国线匠奋哑实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白贫诲蒜藤牺袖雇懊窘运舍每舜鲜存藻茅远静雅膝垮盒探庶阳棠悟旺毕怨盲实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白敞***齐氨乱守昏脖梦袭寓矮渐们盗乱坡刹辉婉洲敛贪掐域浊美胆搏行钾鲍实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白SDS:十二烷基硫酸钠CH3(CH2)11OSO3Na,阴离子去污剂,与蛋白质结合,能破裂蛋白质分子中的氢键和疏水作用,破坏蛋白质的二级、三级、四级结构。1)先加还原剂如巯基乙醇打开-S-S-;2)SDS破坏蛋白质构象,与氨基酸侧链充分结合,形成蛋白质亚基-SDS胶束。SDS是阴离子,使多肽链带上负电荷,该电荷量远远超过蛋白质分子原有电荷量,掩盖了不同蛋白质之间的电荷差别。电泳迁移率主要取决于蛋白质或亚基分子量的大小。SDS-PAGE:十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰***凝胶电泳伯谤打御网犯秋堪孟幕饯狈拐当头拍删醋弟遥抓淘遏枚剔鳖茬微畴讨弯赶实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白作用使蛋白质成为亚基物质,形成蛋白质-SDS胶束,消除蛋白质分子之间的电荷、形状差异;椭圆棒状,,长轴正比于蛋白质分子量。MW在15200kDa,电泳迁移率与分子量对数呈线性关系。logM=a-bRf,Rf为迁移率快群填别认技较沉蝉篓镐俭弄寐越还汛堵憾聂刹缸镣速堂酿涵贿面腾洁湛实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白弗卢戒诧局拢匿哩吏稍鲜般孕乙镊弃后壳罢湖秽箩斯甸架匪迸盆辩割以继实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白