文档介绍：黑豆与黄豆大豆甙元的HPLC测定方法研究摘要:采用高效液相色谱法(HPLC),能够快速、有效建立检测黑豆、黄豆的大豆甙元成分的检测方法。结果:HPLC法可以有效的分理出黑豆以及黄豆的大豆甙元,在色谱条件等不变的情况下,甲醇:水:乙酸=42:57:1的流动对于分离两者的效果都较好,获得的图谱十分清晰,测定的成分峰形以及保留时间较为满意。HPLC法能够同时检测出黄豆和黑豆提取物异黄***中的大豆甙元含量,方法简单、快速,精密度高且重现性能好。关键词:大豆甙元HPLC黑豆与黄豆大豆甙元又名大豆素;黄豆苷元;大豆黄***;4,7-二羟基异黄***大豆甙元隶属于黄***类化合物,是异黄***的一种,也是植物雌激素的一种。它可以从植物中提取,具有雌激素功能,是非甾类化合物[1]。研究表明大豆甙元不溶于水,呈固态,应用高效的检测方法是研发大豆甙元的技术基础,高效液相色谱法(HPLC)作为一种先进的检测技术,就能够十分有效的检测出大豆甙元。1、、黄豆样品选取小黑豆,吉林32、吉林35;吉黄豆1号,吉黄豆2号,平安8、吉林47、GR8836,随机挑选60粒种子均匀粉碎,40日后称取100mg的粉样,加入4ml80%甲醇,,80℃水浴14小时,对12000g的物质离心15min,对预处理液用滤膜进行过滤,过滤的上清液倒入HPLC专用的玻璃瓶封口4℃保存。(LC-20A),产自日本岛津公司;超声仪、低温高速离心机,产自昆山市超声仪器有限公司;高速粉碎机,产自北京中兴伟业仪器有限公司;减压蒸发器、电热恒温水浴锅、分析天平,产自上海一恒科技有限公司。(HPLC级、分析纯),乙***(色谱纯),甲醇(色谱纯),产自美国Fiser公司;乙***(色谱纯),乙酸(分析纯),磷酸(分析纯),来自山东禹王试剂;乙醇(分析纯),来自北京化工厂;二次重蒸水,来自哇哈哈纯净水;食用酒精;染料木素,纯度≥98%,日本进口;标准大豆苷、苷元、染料木苷。:C18柱(150mm×,;检测波长:260nm;流动相:水:甲醇:乙酸=57:42:1;流速:1ml/min;柱温:常温;进样量:10uL;分析时间,每份样品45~55min。每份样品平行测量3次,再求峰面积的平均值,根据峰面积定量,依照时间定性,根据标准品的标准曲线计算样品中的大豆甙元的量。,放于10ml的容量瓶中,甲醇溶解,摇匀充当标准溶液贮备液。再精密称取储备液2ml,甲醇定容至5ml,过滤膜过滤,充当标准对照品的使用液。用10ul标准对照品的使用液,按照以上色谱条件,用HPLC分离测定出吸收峰面积。吸收峰面积为Y轴,组分浓度为X轴绘制标准曲线,观察线性关系。,加30ml80%的乙醇,离心20min,微孔滤膜过滤,制备供测样品液。以标准样品溶液的分离测定方法进行研究分析,计算样品中大豆甙元的含量。2、:%磷酸=55:45;B含5%乙酸和25%甲醇水溶液;C甲醇:水:乙酸=42:57:1;%磷酸和乙睛梯度洗脱。4种流动相进行分离检测出的黄豆、黑豆醇提取物中的大豆大豆甙