文档介绍：重组水蛭素的聚乙二醇修饰李雪芹,候蓓蓓,赵军,田明玉,修志龙*大连理工大学环境与生命学院大连116024摘要:目的水蛭素因血浆半衰期短而严重限制了其临床应用,聚乙二醇修饰能有效地延长其半衰期。本文通过比较不同修饰位点、修饰方法所得单修饰产物的比率、纯度及其活性保留率,从而得到修饰专一性强且活性保留率较高的修饰策略。方法采用液相和固相修饰方法,用琥珀酰亚胺活化的PEG、;用SDS-PAGE分析产物的修饰度,并用离子交换柱对修饰后的产物进行分离,然后用凝血酶滴定法测定水蛭素单修饰产物的体外抗凝活性。。结果、,水蛭素单修饰率都高达90%以上,但二者的单修饰活性保留率相差较大。,液、固相单修饰活性保留率为34%、%;%、96%。结论条件下,采用“离子交换柱辅助”固相修饰的方法对Lys进行定点修饰能得到较高产率和较高活性保留率的单修饰产物。关键词:重组水蛭素;SC-mPEG;抗凝活力;binantHirudinLiXueqin,HouBeibei,ZhaoJun,TianMingyu,XiuZhilong*DepartmentofBioscienceandBiotechnology,SchoolofEnvironmentalandBiologicalScienceandTechnology,DalianUniversityofTechnology,Dalian116024,ChinaAbstract:-thrombinactivityinvivo,itsshorthalf-,monlyusedasaneffectivemethodtoprolongitshalf-’“packed-bed”andanionexchangecolumnwereusedtofavortheformationofmono----PEGylatedproductwithapurityofmorethan90%:theanticoagulantactivityofsolutionandsolidmethodswere34%and%respectivelyat;55%、96%-PEGylatedr-:binanthirudin;SC-mPEG;anticoagulantactivity;moleculardynamicsmodeling前言水蛭素是含65个氨基酸残基与3个二硫键的多肽,分子量约7000,是迄今为止发现的特异性最好的凝血酶抑制剂[1],而凝血酶诱发的血液凝固是诱导血管血栓形成的重要原因,因此水蛭素对各种血栓病均有疗效。然而水蛭素有一些显著的药用缺点,如血浆半衰期较短,一般只有60-100分钟,患者需不断注射才能维持抗凝效果,导致治疗成本较高,且重复注射也会引起一些不良反应[2-4]