Tapasin过表达对Tca8113细胞增殖和凋亡的影响.doc

文档介绍：
Tapasin 过表达对 Tca8113 细胞增殖和凋亡
的影响#
蒋倩,叶冬霞,张志愿**
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(上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔颌面外科,上海市口腔医学研究所,上海市口
腔医学重点实验室,上海 200010)
摘要:目的:Tapasin,又称为“HLAI 类分子特异性的伴侣分子”,在协助内质网中空载的
HLAI 类分子选择高亲和力的抗原肽和增强肿瘤特异性的 CTL 细胞的活化起着关键性的作
用。有研究表明,Tapasin 的表达下调可见于许多肿瘤组织中,并且与肿瘤的病理分级,淋
巴结转移以及患者的生存率密切相关。鉴于此,本研究中我们构建 Tapasin 真核表达载体,
并观察其对 Tca8113 细胞周期,细胞凋亡及增值的影响。方法:根据 Tapasin cDNA 的全序
列设计引物,用 RT-PCR 的方法从正常口腔黏膜组织的总的 RNA 中获取 Tapasin 的 cDNA
编码区域的全序列,经测序其与目的序一致。将获取的 Tapasin 序列克隆至 pCMV-Tag3B 真
核表达质粒载体中;将构建的 Tapasin 过表达质粒载体 pCMV-Tag3B-Tapasin 转染到口腔癌
细胞株 Tca8113 , 并用空载体 pCMV-Tag3B 作为对照, 利用 G418 筛选稳定表达
pCMV-Tag3B-Tapasin 的 Tca8113 细胞株。通过 Western blot 检测转染后细胞 Tapasin 蛋白水
平的表达;MMT 法和流式细胞仪分别检测 Tapasin 过表达后 Tca8113 细胞生长,增殖,凋
亡的变化。结果:成功构建含人 Tapasin 基因全长的 pCMV-Tag3B-Tapasin 表达质粒。以
Tca8113 作为靶细胞进行转染,经 Western blot 证实,转染后 Tapasin 蛋白水平表达明显增加,
细胞适于所构建的 Tapasin 质粒的转染。进一步检测了 Tapasin 转染对 Tca8113 细胞生长行
为的影响。MTT 试验显示:Tapasin 基因过表达后,Tca8113 细胞的生长明显受到抑制(p
<);细胞周期结果显示:Tapasin 基因过表达能够明显较少 S 期的细胞数,相应 G1 期
的细胞数比例增加(p<);细胞凋亡结果显示:Tapasin 基因过表达能够促进 Tca8113
的早期凋亡(p<)。结论:成功构建了 Tapasin 真核表达质粒,Tca8113 细胞转染后 Tapasin
表达的增加。过表达 Tapasin,可抑制 Tca8113 细胞的增殖;细胞周期阻滞于 G1 期,阻断
癌细胞由 G1 期向 S 期的转换,抑制 DNA 的合成和组装,从而诱导肿瘤细胞的凋亡。因此,
Tapasin 基因可以考虑作为肿瘤基因治疗的靶基因。
关键词:口腔癌;Tapasin;凋亡;细胞增殖
中图分类号:
30
Effect of overexpression of Tapasin on proliferation and
apoptosis of Tca8113
Jiang Qian, Ye Dongxia, Zhang Zhiyu