文档介绍：药学毕业论文--高效液相色谱法测定昆明石杉中石杉碱甲的含量高效液相色谱法测定昆明石杉中石杉碱甲的含量作者:李齐激,邹娟,王冲,潘炉台【摘要】目的采用高效液相色谱,HPLC,法测定昆明石杉中石杉碱甲的含量。方法采用ZORBAXSB-C18色谱柱,150mm×,5μm,,流动相:?L-1磷酸二氢钾-乙腈,92?8,,检测波长:310nm。~,r=,,%,%。结论首次对昆明石杉中石杉碱甲的含量进行测定,该方法易行、灵敏、准确。【关键词】,为我国特有种,主要分布于云南、贵州等地,生于灌木下、苔藓丛中,1,。20世纪80年代,我国科学工作者从同属植物蛇足石杉中分离到石杉碱甲(Hup-A),并阐明它是一种可逆性乙酰胆碱酯酶抑制剂,对治疗重症肌无力、记忆力减退和早老年痴呆具有较好的效果,2,3,,现已被广泛应用于临床。为了科学、合理地利用石杉属植物资源,本实验首次采用HPLC法对昆明石杉中石杉碱甲的含量进行测定,为寻找和筛选石杉碱甲新的植物资源提供科学依据。11仪器与试药Aigent1100型HPLC色谱仪(带四元泵,自动进样器,紫外检测器等);电子分析天平,日本岛津,;KQ50B超声清洗器,昆山市超声仪器有限公司,;电热恒温水浴锅,上海医疗器械厂,;石杉碱甲对照品,中国药品生物制品检定所,批号:100243-200401,;乙腈,色谱纯,;二次重蒸水;其他试剂均为分析纯。实验药材采至贵州黔东南,由贵州科学院生物研究所王培善教授鉴定为昆明石杉H,kunmingensisChing.,标本存放于贵阳中医学院民族医药研究所,标本凭证,20056,。-C18色谱柱,150mm×,5μm,,?L-1磷酸二氢钾-乙腈,92?8,,检测波长为310nm,流速1ml?min-1,柱温25?,进样量为5μl。在此色谱条件下,样品中的石杉碱甲与其他峰能达到基线分离,其理论塔板数为4656,。,对照品与样品的色谱图见图1。,每次加入200ml石油醚提取3次,弃去滤液。滤渣再用95%的甲醇提取3次,合并滤液并回收溶剂,加入2%的酒石酸溶解,,再用氯仿萃取至Dragendorffor’s反应呈阴性,挥干有机溶剂,用无水乙醇溶解并定容至25ml即得。,?ml-1对照品溶液,,,,,,?ml-1的对照品供试液,在色谱条件下测定。以进样浓度对峰面积进行回归,得方程:Y=+,r=。~。,在色谱条件下重复进样6次,%,n=6,。,每隔2h测定1次,考察石杉碱甲的含量变化,%,n=6,,表明供试品在10h内稳定。,按“”项的要求制备6份供试液,在色谱条件下分别进行测定,结果Hup-%,n=6,。,每份1g,分别加入对照品供试液,?ml-1,100ml,按样品制备方法和色谱条件,制备加样回收供试液进行测定,计算回收率,见表1,。%,RSD=%,n=6,。表1石杉碱甲加样回收率实验结果,略,“”项的要求精密称取样品3份,制备供试液,按色谱条件进行测定,重复3次,取平均值,%。3讨论首次采用HPLC法测定昆明石杉中石杉碱甲的含量。测定方法是在其它石杉中石杉碱甲含量测定,4,5,方法的基础4上,改用ZORBAXSB-?L-1磷酸二氢钾-乙腈,92?8,为流动相。实验证明该方法易行、灵敏、准确、可靠。在同科属植物中,昆明石杉是石杉碱甲含量相对较高的一个植物品种,%。【参考文献】,1,王培善,王筱英,贵州蕨类植物志,M,,贵阳:贵州科技出版社,2001:12