文档介绍：雌激素受体及孕激素受体测定人乳腺癌组织中,有60,70,的组织存在雌激素受体(ER)及,或孕激素受体(PR),其存在状况与诊断、治疗及判断预后有关。受体阳性者约60,用抗相应受体治疗有效;阴性者亦有10,的有效反应率。测定ER及PR的常用方法包括生物化学及形态学两大类;前者为对受体蛋白作定量测定,后者是观察受体在肿瘤组织,包括细胞内的分布及半定量测定。近年来在测定方面屡有改进,如单克隆技术、高效液相及细胞流式计数测定的应用等,尚未作为常规方法应用。目前我国开展的生物化学方法有葡聚糖包裹活性炭液吸附法(DCC法)及蔗糖密度梯度超离心法(SDG法);形态学方面有17-FE细胞化学法及免疫组织化学法(荧光法及酶联法)。由于各自条件不同,所用测定方法也不相同。为便于对资料进行对比分析,本章介绍这些方法,以便统一标准。第一节生物化学法一、葡聚糖包裹活性炭液吸附法(DCC法)3该类方法系通过H标记的雌激素与受体的特异性竞争结合来检测受体,法(葡聚糖包裹活性炭液吸附法,DextranSDG法(蔗糖密度梯度超离心法,SucroseDensityGraientUltracontrifugation)、HPA(羟基磷石灰分析法,CoatedCharcoal)、Hydroxylapatite)、鱼精蛋白沉淀法、琼脂糖凝胶电泳法(AGE)等,法和SDG法为经典方法。3(一)测定原理在一定条件下,以氚标记雌二醇([H]E)为配体,与受体结合,以葡聚糖包裹活性炭液吸附游离的甾体激素,2用液闪法测定与受体结合的标记激素含量,表示受体的量。以激素与受体结合的动力学方法计算受体含量。(二)测定方法1(标本处理:乳腺癌标本离体后立即分成两份,一份送病理检查,另份立即放入冰壶,送实验室作受体测定。剪除待测标本中肿瘤周围的各种正常组织及坏死组织后,以生理盐水冲洗,吸干后置液氮罐中保存,待测定。制备上清液:全过程均在0,4?下进行。2((1)组织粉碎:称湿重后,剪成碎块或用Auto-pulverizer于冰冻下粉碎。(2)制备匀浆:以PolytzonPT-10-ST匀浆器(或玻璃匀浆器),用1:10(重量:体积)、(,LTris-HCl,,LEDTA,,L二硫苏糖醇DTT),匀浆3次,每次5秒,间隙15秒。(3)离心:匀浆液以105,000×g超速离心1小时(或7000×g低温高速离心15分钟),得上清液备用。(三)雌激素受体测定1(方法与步骤3(1)两列试管分别加入一系列不同浓度的[H]E50μ1,,,,,,,,L共72个浓度,分4组。(2)第一列试管(共2组)为结合管,分别加入50μ1TED缓冲液,以测定其总结合量;第二列试管(共2组)为对照管,分别加入33200倍于[H]E浓度的己烯雌酚(DES)溶液,抑制[H]E与ER结合,以测定其非特异性结合量。22(3)每管各加入150μ1乳腺癌上清液,每管均设重复管。(4)各试管均置0,4?冰箱18,20小时。(5)液(,活性炭,,葡聚糖和含10,,LTris-HCl、),将分离游3离的[H]E、DCC液用电磁搅拌器搅拌,吸取混匀的试管内容物,