文档介绍：醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白点凛奸隙明斡弥芭绍丽忧年傅椰韵梯满架攀右倾拦苹斑裔幢妖告份阔脏浸醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白目的要求(1)学****醋酸纤维素薄膜电泳原理;(2)掌握醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白的操作技术实验原理采用醋酸纤维素薄膜为支持物的电泳方法,叫做醋酸纤维素薄膜电泳。醋酸纤维素,是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯。将它溶于有机溶剂(如***和***仿等)后,涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结构,有强渗透性,厚度约为120微米。本实验以醋酸纤维素为电泳支持物,分离各种血清蛋白。血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白和各种脂蛋白等。各种蛋白质由于氨基酸组成、分子量、等电点及形状不同,在电场中的迁移速度不同。以醋酸纤维素薄膜为支持物,,染色后可显示5条区带。其中白蛋白的泳动速度最快,其余依次为α1-、α2-、β-及γ-球蛋白。:用镊子取醋酸纤维薄膜1张(识别光泽面和无光泽面,并在角上用笔做上记号),小心平放在盛有缓冲液的平皿中,浸泡20min左右。“滤纸桥”:根据电泳槽膜支架的宽度,裁剪尺寸合适的滤纸条。在两个电极槽中,各倒入等体积的电泳缓冲液,在电泳槽的两个膜支架上,各放两层滤纸条,使滤纸一端的长边与支架前沿对齐,另一端浸入电泳缓冲液中。当滤纸全部润湿后,用玻璃棒轻轻挤压在膜支架上的滤纸以驱赶气泡,使滤纸的一端能紧贴在膜支架上,即为滤纸桥。:将浸透的薄膜从缓冲液取出,夹在两层粗滤纸内吸干多余的液体,然后平铺在玻璃板上(无光泽面朝上。点样时,先在点样器上均匀地沾上血清,再将点样器轻轻地印在点样区内,使血清完全渗透至薄膜内,形成一定宽度、粗细均匀的直线。:将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤纸桥上(点样面朝下),另一端平贴在阳极端支架上。盖上电泳槽盖,使薄膜平衡10min。通电,-,电泳时间约40分钟。:电泳完毕后将薄膜取下,放在染色液中浸泡10min。:将薄膜从染色液中取出后移置漂洗液中漂洗数次,隔5分钟左右换一次漂洗液,连续更换三次,直至背景蓝色脱净。取出薄膜放在滤纸上,吸去多余溶液。苇肾九