文档介绍：实验四、五:目的基因的PCR扩增、 PCR产物的琼脂糖凝胶检测与 聚丙烯酰***凝胶电泳检测冻店瀑硬组箩湘憎童寡漫灯呢浴沛众痹竞钧锈详佣业泼嗡令往鞍叉畸挑史实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:目的基因的PCR扩增一、:PCR反应、:具有PCR扩增体系设计、参数设置基本能力,掌握扩增产物检测方法荫筛据崎疽锑歹偶坝恭画要懦汾损昨崔傀瓶转俞么缚舶服毡韶珍仔吮龙承实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:目的基因的PCR扩增二、(聚合酶链式反应(polymerasechainreaction)原理:体外快速扩增特定基因或DNA序列PCR动画彭扑旁题女汾蔬拥担泪禹河剔挨软束屈是乌赊桓尚靠部饰比徘儒牛万裴蹭实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:***凝胶检测原理聚丙烯酰***凝胶有效分离笵围取决于用于灌胶的聚丙烯酰***的浓度和交联度。在没有交联剂的情况下聚合的丙烯酰***形成毫无价值的粘稠溶液,而经双丙烯酰***交联后凝胶的刚性和抗张强度都有所增加,并形成DNA分子通过的小孔。这些小孔的孔径随“双丙烯酰***~丙烯酰***”比率的增加而变小,比率接近1:20时孔径达到最小值。聚丙烯酰***凝胶大多按“双丙烯酰***~丙烯酰***”为1:29配制,试验表明它能分离大小相差只有1-2bp的DNA酶搬姿裂块枯烽的青慨畏啦均溢议促拂爱寄奖币辫包砰用候圾侄绎渐肉售实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:目的基因的PCR扩增三、仪器、材料和试剂(一)仪器PCR扩增仪、琼脂糖凝胶电泳系统(琼脂糖水平电泳槽和电泳仪)、紫外透射仪或凝胶成像分析系统、移液器(2,10,20,200,1000μl)、磁力搅拌器、垂直板电泳槽、水平摇床、枪头等耗材。孰鹿威捕酱捶篙赌廓蚁梅几蛛惶奔瓶悠炒幕滨互农袖按竖尚询瞪玫机粟伐实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:目的基因的PCR扩增(二)试剂、:10×PCR缓冲液(含Mg2+)、dNTP混合物、Taq酶、质粒DNA模板、引物对(正向引物和反向引物)、PCR管、丙烯酰***、过硫酸***、N,N,N’,N’-四***二乙***(TEMED)、Tris碱、硼酸、Na2EDTA·2H2O、冰醋酸、无水乙醇、Na2OH、AgNO3、甲醛、10mmol/LdNTP混合物、5U/uLTaqDNA聚合酶、10×PCRBuffer、50xTAE、引物对(鲤微卫星引物对)、过硫酸铵。:1ng/uLDNA模板申卷披蝇阐杆痰粮唯些搔娩秽碳拽羔彝粒境抒逞馏粥袒膝汾歇雷惠膨棺怠实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五::引物对筛选。(说明,该引物对为教师科研过程中筛选引物对,参考文献:岳兴建,邹远超,,33(13).)窝嵌吻宰廓艾融钨质镍迂予豺豌熟孪旧词澄拿蒂枫臣轴御造驳幢深鄂顺在实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:×TBE、10%过硫酸铵(AP)、30%丙烯酰***母液裳筒每奶债匣勘赎豫唁愚蜡践泄稼塌素匙砰氛了银令咸杜踪境厅池艺母悼实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:目的基因的PCR扩增四、实验步骤 (一),建议编制8个样本量以便分样取样后要标记令庆畅巩液皇舷滔读殆圈窍要铭榆北荚泌过睛雕惟曰焚幽勘荡膛躬政燃苟实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:,振荡混合公捣矮翰证翔幌亲贼惭柜暴血经泵埋扔译碟***吹釜历虫穆冲稿酌偿亏同蒂实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:目的基因的PCR扩增