文档介绍：:..实验室环境和人体表面的微生物检查生命科学学院生科3班郑小煜201100140069同组者:赵莉刘梦迪高瑞2012年9月26H一、 实验忖的和要求1、 明确配制培养基的制备原理,掌握配制培养基的一•般方法步骤。2、 学****并掌握高压蒸汽灭菌的原理和操作方法。3、 证明实验室环境和人体表面存在微生物。4、 体会无菌操作的重要性。5、 观察不同类群微生物的菌落形态特征。二、 实验原理平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分,当取门不同来源的样品接种于培养基上,在37°C温度下培养,1—2天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖,形成一个町见的细胞群体的集落,称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点,例如菌落的大小,表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑,边缘整齐或不整齐,菌落透明或半透明或不透明,颜色以及质地疏松或紧密等。因此,可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。三、 实验器材1、 培养基牛肉膏蛋白月东琼脂平板(配方/1000mL:牛肉膏3g,蛋口10g,NaCI5g,财旨15-20g,水1000mL,-),lmol/LNaOH/HCI2、 溶液和试剂无菌水3、 仪器和其他用品灭菌棉签(装在试管屮),试管架,煤气灯或酒精灯,记号笔和废物缸,试管,三角瓶,平板,PH试纸,牛皮纸,纸绳等。四、 实验步骤1、培养基制备(1) 计算:按培养基配方比例依次计算出所需要的牛肉膏、蛋白腺、NaCI>琼脂的质量。(2) 称量:按计算值依次准确地称取所需质量的牛肉膏、蛋白腺、NaCI放入烧杯中。牛肉膏常用玻璃棒挑取,放在称量纸上,称量后直接放入水中,取出纸片。(3) 溶化:在上述烧杯中先加入少于所需要的水量,用玻璃棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解。药品完全溶解后,补充水到所需的总体积,如果配制固体培养基,将称好的琼脂放入已溶的药品中,再加热溶化,最后补充所损失的水分。在制备用三角烧瓶盛固体培养基时,一般也可以先将一定量的液体培养基分装于三角烧瓶屮,%的量将琼脂直接分别加入各三角烧瓶中,不必加热熔化,而是灭菌和加热熔化同步进行,节省时间。(4) 调PH:在未调PH前,先用精密PH试纸测量培养基的原始PH,如果偏酸,用滴管向培养基中逐滴加入lmol/LNaOH,边加边搅拌,并随时用PH试纸测其PH,~7・6仮之,用lmol/LHCI进行调节。(5) 分装:按实验要求,可将配制的培养基分装入试管内或三角瓶内。①液体分装:分装髙度以试管髙度的圳左右为宜。分装三角瓶的量则根据需耍而定,一般以不超过三角烧瓶容积的V2为宜。②固体分装:分装试管,其装量不超过管高的1/5,灭菌后制成斜面。(6) 加塞:将培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞,以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染。(7) 包扎:加塞后,将全部试管用麻绳捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、配置FI期。三角烧瓶加塞后,外包牛皮纸,用麻绳以活结形式扎好,使用时容易解开,同样用记号笔注明培养基名称、组別、配置日期。(8) 灭菌:,121°C,30min高压蒸