文档介绍：小鼠粒细胞集落刺激因子G-CSFELISAKit小鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号:E0042m预期应用ELISA法定量测定小鼠血清、血浆或其它相关液体中粒细胞集落刺激因子(G-CSF)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中G-CSF水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入G-CSF抗原、生物素化的抗小鼠G-CSF抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的G-CSF呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。:一块(96孔)(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为2,000pg/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释2,000pg/ml,1,000pg/ml,500pg/ml,250pg/ml,125pg/ml,,,样品稀释液直接作为标准浓度0pg/ml,临用前15分钟内配制。如配制1,000pg/ml标准品:,000pg/,混匀即可,其余浓度以此类推。样品稀释液:1×20ml/瓶。:1×10ml/瓶。:1×10ml/瓶。检测溶液A:1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液A1:100稀释,(每孔100ul),-。如1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。:1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。:1×10ml/瓶。:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。:1×10ml/瓶(2NHSO4)。:请离心后收集上清,并将标本保存于-20?,且应避免反复冻融。:标本请于室温放置2小时或4?过夜后于1000xg离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20?保存,但应避免反复冻融。:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2-8?C1000xg离心15分钟,或将标本放于-20?保存,但应避免反复冻融。注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。操作步骤实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul,余孔分别加标准品或待测样品100ul,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37?反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶