文档介绍：有丝分裂实验植物细胞周期观察一、实验目的1(学会植物细胞、组织的固定、离析和压片方法,了解并初步掌握制作临时玻片和永久玻片的方法。2(观察有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变化过程,着重了解分裂期内中、后期染色体变化的特征。二、实验原理植物根尖分生组织的细胞,依一定的程序有规律地进行着有丝分裂过程,植物种类不同,细胞周期所需时间不同。每天都有分裂高峰时间,此时把根尖固定,经过染色和压片,再放置在显微镜下进行观察,可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。一些植物根尖细胞的分裂周期(小时)根尖与茎尖是有丝分裂的高发部位,根尖由于取材方便,是观察植物染色体最常用的材料,根尖染色体压片法,是观察植物染色体最常用的方法,也是研究染色体组型、染色体分带、染色体畸变和姊妹染色单体交换的基础。如果植物种子难以发芽,或仅有植株而无种子,也可以用茎尖作为材料。实验结果显示:植物细胞分裂周期的长短不尽相同,通常在十到几十小时之间,温度明显地影响细胞分裂周期,同时不同植物有丝分裂高峰时间不尽相同,洋葱根尖细胞以6点到9点分裂相较多。适于取材。三、实验材料大蒜、洋葱的鳞茎或蚕豆的种子四、实验器具和药品1(用具:载玻片,盖玻片,指管,试剂瓶,滴瓶,镊子,解剖针,吸水纸。2(药品:无水酒精,冰醋酸,醋酸钠,改良苯酚品红。五、实验过程1(材料培养先剪去洋葱的老根,然后置于盛有水的烧杯上,等不定根长出2cm时,进行预处理;或将蚕豆等种子经过吸胀处理24小时后,平展于铺有吸水纸的白磁盘中,加入适当量的水,于25?培养,待侧根长到2cm进行预处理。2(预处理预处理可以降低细胞质的粘度,使染色体缩短分散,防止纺锤体形成,使更多的细胞处于分裂中期,一般在分裂高峰前把根尖放到药剂中处理3—4小时。可利用进行处理的药剂很多,如秋水仙素、对二***苯、8—羟基喹啉等,也可以经过低温处理以达到同样的效果,较成功的例子主要是一些禾本科的农作物,例如:小麦、黑麦、大麦用1~4?,水稻和玉米用6~8?,均获得较好的效果。处理方法是将活体或切取根尖侵入自来水或蒸馏水中,放置在冰箱中合适的温度层处理20—40小时。在野外或无冰箱条件下,可在保温瓶中装一些冰块做低温处理。处理时机:,2cm左右时进行处理,此时分裂相较多,制片效果好。另外,各种生物体细胞分裂高峰期也不尽相同,于细胞分裂高峰期取材效果为好。例如洋葱根尖细胞以上午6—9时左右为分裂高峰期,蚕豆则每日有两个分裂高峰期,分别为上午9时左右和下午2—3左右。3(取材固定将预处理后的根尖剪下,放入卡诺固定液,固定2,24小时。然后依次放入90,、80,和70,酒精溶液,最后保存于70,酒精溶液中放于冰箱中,但保存时间最好不超过2个月。4(制片:水洗:将从保存液中取出的根尖用水冲洗掉酒精;解离及制片:解离的目的是使分生组织细胞间的果胶质分解,细胞壁软化或部分分解,使细胞和染色体容易分散压平,解离方法有酸解法和酶解法。酸解法是用盐酸水解根尖,步骤简便、容易掌握,广泛应用于染色体计数、核型分析和染色体畸变的观察。根尖分生组织经过酸解和压片后,都呈单细胞,但是大部分分裂细胞的染色体还包在细胞壁中间。将水洗后的根尖放到0(1mol,LHCl中,在60?水浴中解离8,10分钟,或用浓盐酸:乙醇,1:1混合溶液处理根尖10分钟。用蒸馏水漂洗酸解后的