文档介绍：:含有缓冲盐溶液的流动相的清洗方法:1、先用100%的纯水冲洗,打开排放阀,用3~5ml/min的流量,洗二十分钟左右后停泵。此举主要是针对吸液系统、泵头、进出口单向阀等体积较大的空间的清洗2、再用95:5的甲醇/水清洗整个系统,关闭排放阀,用1ml/min的流量,洗30~60分钟后停泵。此举主要是用水清洗整个系统中的盐,用5%的甲醇主要是为了保护色谱柱。3、最后用100%的甲醇清洗整个系统,用1ml/min的流量,洗2分钟左右,然后关机。如果流动相中不含盐,则使用上述第三步清洗即可。当固定相的极性大于流动相的极性时,,,可使用如正己烷的低极性流动相,在用于反相色谱时,(Silica)以及其他具有极性官能团***基团,如(NH2,APS),CPS)的键合相填料。这反向色谱用的填料常是以硅胶为基质,,常用的反向填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl),柱上固定相与流动相之间极性的对比。若固定相极性大于流动相,为正相柱,反之,为反相柱。通常为反相柱应用较多。所有色谱均适用,包括纸色谱和薄层。现在一般都用反相,正相在样品对水敏感等特殊情况下才使用。正相的固定性是极性的,流动相是非极性的,适于分离强极性物质。反相的固定性是非极性的,流动相是极性的,适于分离弱极性物质。正相色谱柱与反相色谱柱的区别本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强;反相色谱柱填料极性弱,洗脱顺序由强到弱。以下是详细说明:1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)以及其他具有极性官能团***基团,如(NH2,APS),CPS)的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基团极性较强,因此,分离的次序是依据样品中各组分的极性大小,即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如正已烷(Hexane),***仿(Chloroform),二***甲烷(MethyleneChloride)等。2、反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲液与甲醇、乙***等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出,而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。色谱的正反相是根据固定相和流动相的相对极性比较而区分的。一般情况如下:正相色谱:固定相极性大于流动相极性:常见的色谱柱有:硅胶色谱柱、氨基色谱柱、苯基色谱柱、***基色谱柱等。反相色谱:固定相极性小于流动相极性:常见的色谱柱有:C18色谱柱、C8色谱柱等。“生化色谱网”在色谱方面非常专业,建议你去看看。那里对色谱产品都按照“正相、反相”进行了区分。你查一下就知道了。正相色谱用的固定相通常为硅胶,以及其他具有极性官能团,如***基团和***基团的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基或其他团的极性较强,因此,分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小,即极性强弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如:正乙烷、***仿、二***甲烷等。反相色谱填料常是以硅胶为基础,表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。反相色色谱所使用的流动相极性较强,通常为水,缓冲液与甲醇,已***等混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出,而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。常用的反相填料有C18、C8、C4、C6H5等。反相色谱切换正相色谱流程:1、先将色谱柱用相应的溶剂冲洗干净,然后将色谱柱拆下来密封保存。用双通将进样器与检测器连接。2、将贮液瓶内装入300ml的二次蒸馏水,。注意观察泵压。3、将流速渐次降到0ml/min,把二次蒸馏水更换为甲醇,,。。4、用同样的方法将甲醇更换为异丙醇、四氢呋喃,各冲系统1h5、最后将四氢呋喃更换为预先配制好的流动相冲系统1h,同时将柱塞杆清洗系统内的10%异丙醇更换为流动相,保持50-60滴/min的速度清洗柱塞杆。再将双通更换为正相色谱柱,待色谱柱平衡好以后就可分析样品了。请问正相色谱柱与反相色谱柱都有什么区别,在使用过程中,各需要注意哪些方面,另外,