文档介绍：高住低训经雄激素-雄激素受体对骨骼肌蛋白质高住低训经雄激素-雄激素受体对骨骼肌蛋白质合成的作用1叶鸣1,~北京,100084,~北京,100084,E-mail:fanxingz@摘要:本研究以雄性SD大鼠为研究对象~模拟高住低训~测试并分析睾***、AR蛋白表达、骨骼肌总蛋白含量的变化~探讨低氧和运动通过T-AR对骨骼肌蛋白质合成的作用及其机理。结果提示高住低训比单纯运动通过T,AR水平抑制蛋白质合成~影响机体恢复,低氧、运动或高住低训通过睾***水平调节AR蛋白水平的改变~最终影响骨骼肌蛋白含量。关键词:高住低训~睾***~雄激素受体~。高住低训期间运动员白天进行耐力训练,肌肉蛋白质分解增加,合成减少,存在着蛋白质净降解现象,耐力运动后蛋白质以合成代谢为主,蛋白质合成增强的趋势一直持续到第二天训练之前。晚上在低氧环境中休息是否抑制骨骼肌蛋白质合成,直接关系到运动员的恢复、运动员力量、速度素质的保持或提高。目前有关高住低训对骨骼肌蛋白质合成影响的研究只局限在血睾***水平,因对运动员进行肌肉活检不能实施,所以本研究以大鼠为研究对象,模拟高住低训,观察耐力运动后进行低氧暴露是否影响血睾***水平,通过血睾***影响骨骼肌睾***含量、雄激素受体(AndrogenreceptorAR)含量,最终影响骨骼肌蛋白质的合成。目前国内外未见高住低训对骨骼肌睾***及AR作用的报道。、SPF级2月龄SD大鼠40只,体重180-200g,购入后经体重分层后随机分成4组:常氧安静组、低氧暴露组、常氧运动组、高住低训组,每组各10只。由北京大学医学部实验动物科学部提供动物,在SPF级动物房中饲养。常氧运动组和高住低训组先进行适应性跑台训练1周,然后进行正式实验4周:常氧安静组在常氧环境下安静生活,低氧暴露组每晩8点到次日凌晨早8点在常压低氧帐篷中进行低氧暴露12h,常氧运动组白天在常氧环境中进行耐力运动1小时,高住低训组在白天进行1小时的耐力运动后,晚上在低氧帐篷中进行低氧暴露,运动和低氧暴露的方式和时间分别同常氧运动组和低氧暴露组。各组的生活、运动和低氧暴露方式具体见表1。,各组动物出低氧帐篷后分别用25%乌拉坦麻醉后腹主动脉取血处死,取出的血样在室温下倾斜静置1-2h后,常规离心制备血清,置于-80?冰箱保存待测。快速取出腿部的腓肠肌,剔除脂肪和筋膜,用预冷的生理盐水洗净,滤纸吸干投入液氮冷冻后置于-80?冰箱保存待测。1本课题得到教育部博士点基金项目(20050043002)的资助。-1-大鼠分组情况一览表表1分组生活方式运动和低氧方式常氧安静组在常氧环境下安静生活训练方式:低氧暴露组晚上在低氧环境下暴露12h动物跑台耐力运动,跑台坡度为5?,跑速为20m/min,持续运动1h/d,6d/w,4w。白天在常氧环境下运动1h常氧运动组白天在常氧环境下运动1h~低氧帐篷氧浓度:%,大约3500m,,4w。***采用放免法,按照试剂盒操作步骤加样,利用,计数仪直接读出样品浓度。***含量称取40mg的腓肠肌,用眼科小剪迅速剪碎,按1:4的比例加入组织匀浆介质,匀浆20秒*3次,匀浆速度为13,OOOrpm,然后在4?,以20,OOOrpm离心20分钟,取上清于-80?储存待测。采用放免法,按照试剂盒操作步骤加样,利用,计数仪直接读出样品浓度。,按试剂盒说明进行。,剪碎放入匀浆器中,以1:4的比例加入细胞裂解缓冲液(50mmol/LTris-,150mmol/LNaCl,1%NP-40,%sodiumdeoxycholate,%SDS,1mMNa3VO4,1mmol/LEDTA,1mmol/LPMSF,2ug/mlLeupeptin),冰浴匀浆。用NanoDrop紫外分光光度计测定蛋白浓度。用2×LoadingBuffer与样品1:1混合,与Marker一起100?煮10min,冷却至室温,离心。每孔上样量40ug,浓缩胶60V,,分离胶90V,,电泳。。电转移后用1×TBST漂洗膜5min,置于5%脱脂奶粉中封闭过夜。洗膜、加一抗(1:500,N-20)sc-816,SantaCruzBiotechnology),?过夜。洗膜、加二抗(1:3000,(4Anti-RabbitIgG