文档介绍：实验二还原糖及总糖的测定[技巧]实验二还原糖及总糖的测定(3、5——二硝水杨酸比色法)目的和要求:1(掌握3、5-二硝基水杨酸比色法测定糖量的原理及方法。2(熟悉722分光光度计基本工作原理和操作方法。原理:各种单糖和麦芽糖是还原糖,蔗糖和淀粉是非还原糖。利用溶解度不同,可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来,再用酸水解法使没有还原性的双糖和多糖彻底水解成有还原性的单糖。在碱性条件下,还原糖与3、5—二硝基水杨酸共热,3、5—二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色物质),还原糖则被氧化成糖酸及其它物质。在一定范围内,还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系,可在分光光度计540nm波长测定棕红色物质的吸光值。查标准曲线计算,便可分别求出样品中还原糖和总糖的含量。多糖水解时,在单糖残基上加了一分子水,因而在计算中须扣除已加入的水量,。该方法是半微量定糖法,操作简便,快速,杂质干扰较少。试剂和材料:1(试剂(1)1mg/ml葡萄糖标准液:准确称取100ml分析纯葡萄糖(预先在105?烘至恒重),置于小烧杯中,用少量蒸馏水溶解后,定量转移到100ml容量瓶中,以蒸馏水定容到刻度,摇匀,冰箱中保存备用。(2)3、5—二硝基水杨酸试剂(又称DNS试剂)甲液——(苯酚)%NaOH中,并稀释至69ml,。乙液——,加到300ml10%NaOH中,再加入880ml1%的3、5—二硝基水杨酸溶液。将甲液和乙液相混合即得黄色试剂,贮于棕色试剂瓶中,放置7—10天使用。(3)碘—碘化钾溶液(碘试剂):称取5g碘和10g碘化钾,研匀后溶于100ml蒸馏水中。(4)酚酞指示剂:%乙醇中。-1(5)6mol?LHCl-1(6)6mol?LNaOH(7)面粉2(器材比色管、离心管、量筒、三角瓶、容量瓶、刻度吸管、玻璃漏斗、滤纸、白瓷板、电热恒温水浴槽、离心机、天平、分光光度计。操作步骤:1(标准曲线的制作取6支干燥试管,编号,按下表所示的量,、5—二硝基水杨酸试剂。管号012345加入试剂葡萄糖标准液(ml)(ml)、5—(ml)总体积(ml),带上小漏斗,在沸水浴中加热5min,立即用冷水冷却至室温,,用橡皮塞塞住管口,颠倒混匀。切勿用力振摇,引入气泡。在540nm波长下,以0号管为空白,在分光光度计上测定1-5号管的吸光值。以吸光值为纵坐标,葡萄糖毫克数为横坐标,绘制标准曲线。2(样品中还原糖和总糖含量的测定(1)样品中还原糖的提取:,置于125ml三角瓶中,以少量水调成糊状,再加入40ml蒸馏水,搅匀,置于50?恒温水浴中保温20min。其间间或振荡,使还原糖浸出。将上液倒入100ml容量瓶中,用少量的蒸馏水多次洗涤三角瓶内残留物,将所得的洗涤液全部收集于100ml容量瓶中,用蒸馏水定容至