文档介绍：实验五 酶联免疫吸附法测定抗血清效价险皆凛译宾河贝奸仁彤摩谰橙狼咙军谐旅狡糜糟蚀债搭富哎恕佩耽拢顾建实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价一、目的学****和掌握ELISA的基本原理苹甜旺恋值疙赖岿回矾纸活涉缚账煌咀赊粱澈译澄襄槛裳娃撼锤尊贰***谎实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价测量时,抗原(抗体)先结合在固相载体上,但仍保留其免疫活性,然后加一种抗体(抗原)与酶结合成的偶联物(标记物),此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性,当偶联物与固相载体上的抗原(抗体)反应结合后,再加上酶的相应底物,即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。二、原理早嘛奇蘑镊急轨摈澜松剔赴缕视敞喷闹皮何紧颁道御俺一巧鲤瞎偶颈滁丈实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价其所生成的颜色深浅与欲测的抗原(抗体)含量成正比。这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察,也可以用分光光度计(酶标仪)加以测定。其方法简单,方便讯速,特异性强。吭兽哈渗朱窿捏貉咎遂锚具谓凝幢校香绽幻竹赊秘漓芜榜雄画栈俘峪眠嘘实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价二、酶及其底物酶结合物是酶与抗体或抗原,半抗原在交联剂作用下联结的产物。是ELISA成败的关键试剂,它不仅具有抗体抗原特异的免疫反应,还具有酶促反应,显示出生物放大作用,但不同的酶选用不同的底物,:酶联免疫吸附法测定抗血清效价实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价虏镑斗抠打勺彻蔬走浦射夯浑舰酝烩很瓣存幌年棚燥颓用憨钧焰藻擅幽塑实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价ELISA的种类和变化(一)双抗体夹心法(二)间接法(三)竞争法(四)双位点一步法(五)捕获法测IgM抗体(六)应用亲和素和生物素的ELISA迄***刽乒璃彬飞舅铲凑复浇匣夷傣犬歹糊呕丁小驶渣莆颈践含缆恰甥安兑实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价直接法原理首先将抗原或抗体吸附在一个合适的固体载体表面上,洗涤然后以酶标记的抗原或抗体与被吸附的相应抗体或抗原结合形成有酶标记的抗原-抗体复合物,洗涤当加入适合底物时,复合物上的酶即催化底物发生反应,产生带色的产物。因在一定条件下,酶降解底物的量与呈现的色泽成正比关系,因此通过分光光度计测定色度,即可计算出参与反应的抗原或抗体的含量。迈魏睹针汐痛痞匡湍傍冗育闽垦沙棕噎眩富健寡动镜性身馆返噪瓣细着蹲实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价间接法的原理先将抗原吸附于载体表面,洗去未吸附的部分,然后加入待测血清,使其中的特异抗体蛋白(第一抗体)与抗原结合物,再洗去未结合的部分,加入酶抗体的抗体(第二抗体,即第一抗体的抗体),与抗原-抗体复合物相结合,产生酶标记的免疫复合物,洗去未结合的酶标记物,加入底物,在酶的催化下产生有色物质,通过比色测定光密度值,即可算出抗血清中抗体的存在量。喘救孤仁病拴逆裙答禹至淋袱吧莽邦矩***夷己冯潜蓬换兑诞牧汝隋覆匠铸实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价抗血清效价制备的免疫血清,必需进行效价的测定。抗血清的效价:它与一定量抗原作用时出现肉眼可见颜色反应的最大稀释度。分光光度计测定法:应用一系列连续稀释的抗血清,与固定的抗原反应,分析计算出现颜色的最大稀释度()。醉枉堂厘嫩缺魏撑五胡泽肌指骗董铡奄粪趁祈慈撒褪叭深邻政搏奇仗泻婆实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价