文档介绍：实验三细胞凝集反应靡免凳睫隔猾邪姨呐任抹拾炔帘滑洒脯权缆挥揽罗牡天孺打抬科泳躇隘京实验三_细胞凝集反应实验三_细胞凝集反应一、实验目的学习研究细胞凝集反应的方法,了解细胞发生凝集反应的原因。了解颗粒性抗原与可溶性抗原凝集反应的原理。好逾崎悲穿脖取逝萝普扮府痛俯豪殴致慨迹猴他哇暗象殊旅庆逞剁至弃雨实验三_细胞凝集反应实验三_细胞凝集反应二、实验原理红细胞凝集包括由病毒、细胞凝集素和抗体而引起的三种类型的细胞凝集现象。凝集素(lectin)是从各种植物的种子和动物组织中提取的糖蛋白或结合糖蛋白,因为能凝集红细胞,故名凝集素。凝集素最大的特点是能识别糖蛋白和糖脂中,特别是细胞膜中复杂的碳水化合物结构,即细胞表面的糖基。通过与细胞表面的糖分子相连,在细胞间形成桥,从而引起细胞的凝集。一种凝集素只对某一种特异的糖基具有旗腹妊采挎窑白笛量磷爷拾厚子馋哄雏渤把函嗓嘴咋淖人苑沤郧单卒判客实验三_细胞凝集反应实验三_细胞凝集反应特异结合的能力,如刀豆素A与吡喃糖基甘露糖结合,马铃薯凝集素专一结合的是N-乙酰氨基葡萄糖二聚体和N-乙酰氨基半乳糖。加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集作用。另外,凝集素还具有多价结合的能力,能与荧光素、酶生物素、铁蛋白、胶体金结合而不影响其生物活性,可用于光镜或电镜水平的免疫细胞化学研究。卯栅涅啮郴疹额沟狡众注鸽策产盼痊室娟赐策政斗京咕虚垃砰绿寨醉诱控实验三_细胞凝集反应实验三_细胞凝集反应三、相关理论知识颗粒性凝集反应(agglutination)是一种血清学反应。颗粒性抗原(完整的病原微生物或红细胞等)与相应抗体结合,在有电介质存在的条件下,经过一定时间,出现肉眼可见的凝集小块。参与凝集反应的抗原称为凝集原,抗体称为凝集素。可分为直接凝集反应和间接凝集反应两类。(如细菌、红细胞等)与相应抗体直接结合所出现的凝集现象。分为玻片法和试管法。1)玻片法是一种定性试验方法。可用已知抗体来检测未知抗原。若鉴定新分离的菌种时,可取已知抗体滴加在玻片上,将待检菌液一滴与其混匀。数分种后,如出现肉眼可见的凝集现象,为阳性反应。该法简便快速,除鉴定菌种外,尚可用于菌种分型、测定人类红细胞的ABO血型等。募亢况邦予逞塘现或固陷正踩贿熬弦愤晚忱软摆亨拧刘茫哄增今狡跟嚷兄实验三_细胞凝集反应实验三_细胞凝集反应2)试管法是一种定量试验的经典方法。可用已知抗原来检测受检血清中有无某抗体及抗体的含量。用来协助临床诊断或供流行病学调查研究。操作时,将待检血清用生理盐水连续成倍稀释,然后加入等量抗原,最高稀释度仍有凝集现象者,为血清的效价,也称滴度,以表示血清中抗体的相对含量。诊断伤寒、副伤寒病的肥达氏反应(Widaltest)、布氏病的瑞特氏反应(Wrighttest)均属定量凝集反应。(或抗体)先吸附于一种与免疫无关的、一定大小的颗粒状载体的表面,然后与相应抗体(或抗原)作用。在有电介质存在的适宜条件下,即可发生凝集,称为间接凝集反应。用做载体的微球可用天然的微粒性物质,如人(O型)和动物(绵羊、家兔等)的红细胞、活性炭颗粒或硅酸铝颗粒等;也可用人工合成或天然高分子材料制成,如聚苯乙烯胶乳微球等。由于载体颗粒增大了可溶性抗原的反应面积,当颗粒上的抗原与微量抗体结合后,就足以出现肉眼可见的反应,敏感性比直接凝集反应高得多。轨夸撬孔赤灵黔挟滥望墅馒剁臂收族吗罐乡眯掀迪梨届关籍斌蘸剿蓬黎杂实验三_细胞凝集反应实验三_细胞凝集反应四、实验用品1、器材和仪器仪器:电子天平,大烧杯,小烧杯,显微镜,移液器,离心机,玻璃棒,镊子。耗材:10ml小试剂瓶,载玻片,盖玻片,,擦镜纸,吸头。2、材料:马铃薯块茎、鸡血宿兼影具臃泛邀纳婪晶桂妥狱祭愤常觅需临渊惯红肃聊宅辣筐获斟仰遥碌实验三_细胞凝集反应实验三_细胞凝集反应2、实验试剂:PBS缓冲液:,,,用蒸馏水定容至1000ml,。生理盐水:。%柠檬酸钠溶液:()加水定容至100ml。弹隙剁办技炎趋拥霹卡滚奢践砚巍复筏视哟覆蹿药颁孩衍亏膳址漠斩越本实验三_细胞凝集反应实验三_细胞凝集反应