文档介绍：雷公藤多苷片高效液相指纹图谱的研究杨春欣,梁健,沈熊,吕迁州(复旦大学附属中山医院药剂科药学研究室,上海200032)摘要:目的雷公藤多苷片有抗炎及抑制细胞免疫和体液免疫等作用,是治疗类风湿性关节炎、肾病综合征、皮肤病等自身免疫性疾病的药物。目前雷公藤多苷片质量控制标准还不太完善,建立雷公藤多苷片的高效液相指纹图谱,为全面而有效地控制雷公藤多苷片的质量,对临床用药的有效性和安全性有很大的意义。方法取不同生产厂家的雷公藤多苷片,采用高效液相色谱法,色谱柱为DiomonislC分析18-1柱,检测波长为218nm,柱温为35?,以水-乙***为流动相,?min的流速,梯度冼脱。结果获得雷公藤多苷片的指纹图谱。其指纹图谱的方法有较好的重现性、精密度和稳定性。不同样品的高效液相指纹图谱的主要峰基本一致,提示不同厂家及批号的雷公藤多苷片的主要成分基本相同,但含量有所不同。确定了18个峰为雷公藤多苷片的共有峰,初步建立了雷公藤多苷片的HPLC指纹图谱,为衡量其质量优劣提供了依据。结论利用雷公藤多苷片HPLC指纹图谱可以较好地反映雷公藤多苷片的内在质量,且该方法简便,快速,有效,灵敏,有助于雷公藤多苷片的质量控制。关键词:高效液相色谱法,指纹图谱,雷公藤多苷片,雷公藤内酯醇雷公藤多苷片是卫矛科(Celastraceae)雷公藤属雷公藤(.)的干燥去皮根经提取、纯化后得到的有效组分。雷公藤多苷片与其它雷公藤制剂相比具有[1]用量小,不良反应少等优点,雷公藤多苷片广泛应用于治疗类风湿性关节炎、肾病综合征、白塞氏三联征、麻风、自身免疫性肝炎及皮肤病等疾病,疗效显著,其生理活性是由二萜[2]内酯、生物碱、三萜等多种成分协同产生。雷公藤多苷片是目前临床上使用较多的非甾体类免疫抑制剂。目前国内雷公藤多苷片至今还没有很完善的质量控制标准,仅对雷公藤内酯醇或雷公[3,4,5]藤内酯甲进行控制,以至不同厂家的产品存在不同程度的差异,为了准确地控制雷公藤[6]多苷片中有效成分群的含量,建立雷公藤多苷片的指纹图谱,对其临床用药的有效性和安全性有很大的意义。1仪器与材料Gillson高效液相色谱仪系统,包括:306型泵,119紫外/可见光检测器,715色谱处理系统,Rheodyne9125型进样阀,配以20μL采样环,805测压仪,811C动态混合器,Gilson818柱温箱。EYELA旋转蒸发仪N1001型(日本东京理化器械株式会社)。B2500S-MTH型超声波清洗仪(上海必能信超声有限公司)。AL204电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。雷公藤多苷片A,H共8个批号(上海复旦复华制药厂和江苏泰州美通制药厂);雷公藤内酯醇对照品,%,雷公藤内酯甲,%,均购自上海科卫医疗技术研究所。中性氧化铝,上海五四化学试剂厂生产;微孔滤膜,,1上海半岛实业有限公司净化器材厂生产。乙酸乙酯,分析纯;乙***(色谱纯,美国Fisher公司);自制纯水;其他溶剂均为分析纯。:采用均匀取样法从雷公藤多苷片取出15片,研细成粉,精密称取400mg,置于25mL三角烧瓶中,加入20mL乙酸乙酯,超声提取30min,过滤,滤液过15g中性氧化铝柱,用30mL乙酸乙酯洗脱,收集全部过柱后的洗脱液,回收乙酸乙酯,得残存物,***溶解,,备用。:精密称取干燥恒重的雷公藤内酯醇对照品-,用乙***溶解并定容在10mL容量瓶中,?mL对照品溶液,备用。:色谱柱:Dikma公司DiamonislC(250mm×,5μm);流动相:水(A)18-1-乙***(B),梯度洗脱:0,70min,A:65%,0%,B:35%,100%;流速:?min,检测波长:218nm;柱温:35?;进样体积:20μL。:本实验选择了210,215,218,219,225nm五个波长进行测定,结果在波长218nm下出现的色谱峰数目适中,内参物雷公藤内酯醇的色谱峰完整,且基线平稳,故选择218nm作为雷公藤多苷片HPLC指纹图谱的检测波长。:采用乙***-水、乙***-%磷酸等不同流动相进行等度或梯度洗脱,结果发现含有磷酸的流动相并不能改变峰型。采用梯度洗脱,可兼得二者的优点。见表1。表1梯度洗脱方案方案时间(min)乙***(%)水(%)1?153565115?4035?10065?020?4040?10060?030?6040?10060?00?302080430?6