文档介绍：实验一 还原糖和总糖的测定姓名:李凯 学号:56031150531、实验目的1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理2、学****比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或***基的糖类,单糖都是还原糖,双糖和多糖不一定是还原糖,其中乳糖和麦芽糖是还原糖,蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同,可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来,对没有还原性的双糖和多糖,可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定,再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计)。还原糖在碱性条件下加热可被氧化成糖酸及其它产物,而氧化剂3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内,还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系,利用分光光度计在540nm波长下测定光密度值,查对标准曲线并计算,便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时,每断裂一个糖苷键需加入一分子水,。3、实验材料和试剂1、实验材料 面粉2、实验试剂①1mg/ml葡萄糖标准液②3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂③碘-碘化钾溶液:④酚酞指示剂:⑤6MHCl和6MNaOH四、实验器材具塞玻璃刻度试管,50ml离心管,100ml烧杯,100ml三角瓶,100ml容量瓶,移液管:1ml;2ml;10ml,恒温水浴锅,离心机,天平,分光光度计。5、操作步骤1、制作葡萄糖标准曲线取7支具塞刻度试管编号,按表1分别加入浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液、蒸馏水和DNS试剂,配成不同浓度的葡萄糖反应液。将各管摇匀,在沸水浴中准确加热5min取出,冷却至室温,用蒸馏水补足至10ml,加塞后颠倒混匀,在分光光度计上进行比色。调波长540nm,用0号管调零点,分别测出1~6号管的光密度值。以光密度值为纵坐标,葡萄糖含量(mg)为横坐标,在坐标纸上绘出标准曲线。2、样品中还原糖和总糖的测定①,放入100ml烧杯中,先用少量蒸馏水调成糊状,然后补足至50ml蒸馏水,搅匀,置50℃恒温水浴中保温20min,使还原糖浸出。,将浸出液用塞棉花的长颈漏斗过滤,沉淀可用20ml蒸馏水洗一次,将过滤的溶液收集在100ml容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,混匀,作为还原糖待测液。②,放入100ml三角瓶中,加15ml蒸馏水及10ml6MHCl,置沸水浴中加热水解30min(水解是否完全可用碘-碘化钾溶液检查)。待三角瓶中的水解液冷却后,加入1滴酚酞指示剂,用6mol/lNaOH中和至微红色,用蒸馏水定容在100ml容量瓶中,混匀。将定容后的水解液过滤,取滤液10ml,移入另一100ml容量瓶中定容,混匀,作为总糖待测液。 6、实验数据第一天葡萄糖标准曲线的测定管号1mg/ml葡萄糖标准液(ml)蒸馏水(ml)DNS(ml)葡萄糖含量(ml)光密度(OD-540nm)      还原糖的测定管号还原