文档介绍：维生素A和维生素E的测定方法(HPLC)                                       杨月欣教授等高效液相色谱法最小检出量分别为VA:;α-E:;γ-E:;δ-E:。,将其不可皂化的部分提取到有机溶剂中。用HPLC法测定维生素A及维生素E的含量。-(1)高压液相色谱仪(带紫外检测器)(2)六孔恒温水浴锅(3)旋转蒸发器(4)高纯氮气(5),:重蒸,不含有醛类物质检查方法:取2ml银氨溶液于试管中,加入少量乙醇,摇匀,再加入10%氢氧化钠溶液,加热,放置冷却后,若有银镜反应则表示乙醇中有醛。脱醛方法:取2g硝酸银溶于少量水中。取4g氢氧化钠溶于温乙醇中。将两者倾入1L乙醇中,振摇后,放置暗处两天(不时摇动,促进反应),经过滤,置蒸馏瓶蒸馏,弃去初蒸出的50ml。当乙醇中:%抗坏血酸溶液(Vc)W/%氢氧化钾溶液(KOH)W/,:用5ml乙醚加1ml10%碘化钾溶液,振摇1min,如有过氧化物则放出游离碘,%淀粉液,水层呈蓝色。该乙醚需处理后使用。:重蒸乙醚时,瓶中放入铁丝或铁末少许。弃去10%初馏液和10%残馏液。-〔e〕芘标准液称取苯并〔e〕芘(纯度98%),用脱醛乙醇配制成1ml相当于5μg苯并〔e〕芘的内标溶液。(纯度85%Sigma公司)用脱醛乙醇溶解维生素A标准品,使其浓度大约为1ml相当于1mg视黄醇。临用前用紫外分光光度法标定其准确浓度。维生素E标准液α-生育酚(纯度95%Sigma公司),δ-生育酚(纯度95%Sigma公司),δ-生育酚(纯度95%Sigma公司)。用脱醛乙醇分别溶解以上三种维生素E标准品,使其浓度大约为1ml相当于1mg。临用前用紫外分光光度法分别标定此三种维生素E的准确浓度。(1)样品皂化称取样品于三角瓶中,加30ml无水乙醇,振摇三角瓶,使样品分散均匀。加入5ml10%抗坏血酸和苯并〔e〕芘标准液2ml,混匀。最后加入10ml氢氧化钾边加边振摇。于沸水浴上回流30min使样品皂化完全。皂化后立即放入冰水中冷却。(2)样品萃取将皂化后的样品移入分液漏斗中,用50ml水分2次洗皂化瓶,洗液并入分液漏斗中。用100ml无水乙醚分两次洗皂化瓶及残渣,乙醚液并入分液漏斗中。轻轻振摇分液漏斗2min,静置分层,弃去水层。然后每次用约100ml水将乙醚液洗至中性,约4-5次。(3)浓缩将乙醚提取液经无水硫酸钠(约5g)滤入150ml旋转蒸发瓶内,用约15ml乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠2次,并入蒸发瓶内,并将其接在旋转蒸发器上,于55℃水浴中减压蒸馏并回收乙醚,待瓶中乙醚剩下约2ml时,取下蒸发瓶,立即用氮气将乙醚吹干。加入2ml乙醇溶