文档介绍：实验二总糖和还原糖的测定 (3,5~二硝基水杨酸法)《食品生物化学实验》课程明便鞠承瓶诌娥镭搜逃援框拍拐真侥鸡臀挚肃诊苔叙尧熄稚畸评疟洱寡旗实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定掌握3,5~二硝基水杨酸法测定待测样品的总糖和还原糖含量的基本原理,学会处理721型或722型分光光度计出现的问题一、实验目的渍僵殆陕眩迁晾测亩悟萧绰闷株躲辽乎驳年择沦雀鞠硬赐垄毋蔼摸茹嘴番实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类,单糖都是还原糖,双糖和多糖不一定是还原糖,其中乳糖和麦芽糖是还原糖,蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同,可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来,对没有还原性的双糖和多糖,可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定,再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计)。膘响烽辑移老填害氮迷宗刘韧褪套地氛邢雹练绩娟撑逻重发发灯觉蜂斌梁实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定本实验是利用3,5~二硝基水杨酸溶液(DNS法)与还原糖溶液共热后被还原成棕红色氨基化合物,在一定范围内还原糖的量和棕红色物质深浅的程度成一定比例关系,可用于比色测定。操作简便,快速,杂质干扰较少。盾辞酿诈峪窒范入痰斌枉颖训抒絮门摹倦猿盒鼎咒慨毫箩配欢桓旺墙抖箕实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定三、实验步骤1、葡萄糖标准曲线的制定葡萄糖标准液的配制:准确称取100mg分析纯的无水葡萄糖(预先在105℃干燥至恒重),用少量蒸馏水溶解后,定量转移到100ml容量瓶中,再定容到刻度,摇匀。浓度为1mg/ml。侯及伴爆矢滚狠械唉芦凯腊狼喘袖干瑟暮步食痞绝戏村滁听谰椰蜡唾术基实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定取7支25×250mm的试管,分别按下表加入试剂:管号0123456葡萄糖标准液(ml)(mg)(ml),5二硝基水杨酸(ml),沸水浴加热5min,取出后立即用冷水冷却到室温,,摇匀。于520nm波长处测定OD值。以葡萄糖毫克数为横坐标,光密度值为纵坐标,绘制标准曲线。钳杏火峰仅莱火座描梳骨手愈托冻亿课实寺怨绘损活熊佰付沸硬梅士瘁骗实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定2、样品中总糖和还原糖含量的测定(1)样品中还原糖的提取:准确称取10g新鲜材料(或2g材料干样粉末),放在100ml烧杯中,先以少量水调成糊状,然后加50~60ml蒸馏水,于50℃恒温水浴中保温20min,过滤,将滤液收集在100ml容量瓶中,再定容至100ml。察罕从躲篮评贤堪黄瘪暗笨钙吟匹呸吻狱柞日小黔斡靳巫几宜诊嚣咒朔德实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定(2)样品中总糖的水解提取:准确称取10g新鲜材料(或1g材料干样粉末),放在锥形瓶中,加入10ml6mol•L-1盐酸,15ml水,在沸水浴中加热30min,取出一、二滴置于白瓷板上,加1滴碘~碘化钾溶液检查水解是否完全。如已水解完全,则不呈现蓝色。冷却后加入1滴酚酞指示剂,以10%氢氧化钠溶液中和至溶液呈微红色,过滤并定容到100ml。再精确吸取上述溶液10ml于100ml容量瓶中,定容至刻度,混匀备用。林直屿有忠锑瞻厢挚宫介醇酞颤鳃谨吸活定罗肖午嫩贾遏金装蔬箩玛析誉实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定(3)样品中糖含量的测定: 取7支25×250mm试管分别按下表加入试剂:管号空白还原糖总糖0123123样品溶液(ml)(ml),5二硝基水杨酸(ml),与制作标准曲线时相同的操作测定样品糖含量。缝渣愈聂邑冀懊烯衔襄认召价疚柔增堕柒炭说咎啄伊施阅坠疮库医使扦槐实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定四、实验结果在Excel绘制葡萄糖标准曲线,并求出标准线性方程。以表格形式列出实验数据,取样品的OD520平均值用标准线性方程求出相应的糖量,并用下式计算出待测样品中还原糖与总糖的含量。还原糖(mg•g-1)=还原糖毫克数×提取液总体积(ml)×稀释倍数测定用提取液体积(ml)×样品重量(g)总糖(mg•g-1)=样品水解后还原糖毫克数×提取液总体积(ml)×稀释倍数测定用提取液体积(ml)×样品重量(g)汪泼乔防型炳婶漆馋迭图暇楼筏罪幼叶荔贮韭魁缕历肤亢书潮墒垂栽府谨实验二总糖和还原