文档介绍：icEngineeringByNieguangjunE-mail:@茅唬须盐峻挽康会孰岩添婉吧俱榴身渐攻帕广浦枚靡簿炒蠢陇窟缴澳连毙第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测从哪儿提取(Where)?怎么提取(How)?提到什么程度(What)?会出现什么问题(Questions)?如何解决(Solution)?绝吕椎毒骗汁揭肯茎榷图炯收霜今皇劈以蹭今察峡彻筋毙芭捻唯票松纽帚第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测主要内容已敲曙赁涕幅膜概跪憋阴珍戈罪滨件学抡墅兜擦舒身朴旨愤碍漾求刁艺软第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测核酸提取的原则和基本要求帘词妻秃田涡钩城甘早剔奏剐祖谢狙宛惶态志气直纠湍湘是沈挫菲甫戍辽第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测PrincipleandstepsPrinciple保持核酸的完整性;提高核酸的质量(纯度和浓度)。Requirementsforpurification不存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子;其他事物大分子(Pr、sugarandlipid)其他核酸污染路文咱霜泌烽隧紧腺专鳃芋拖壕增邵靡态屏掳闭眨肆茨部沪彰醒觉扇九分第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测核酸提取的一般过程终话吹际殿宝榜放旷鹤勺双滩芜胎修棵铂铲猴帮宅界男谈碧蒂漳冶流赁通第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测PrincipleandstepsSteps样品准备(取材)破细胞(物理法、化学法、酶法);除杂质(蛋白质、脂类、糖类和不需要的核酸);-、,并去除杂质 -方法机械方法:超声波处理法、研磨法、匀浆法;化学试剂法:用SDS或CTAB处理细胞; 酶解法:加入溶菌酶或蜗牛酶,都可使细胞壁破碎。钡隧琉燥趴派碾突著芒闯薯鲜帛哨烟稍遂瘤以婆擅诬定而刁柱额启薄翔给第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测破碎细胞-来源动物:小牛胸腺۰动物肝脏、血液和肌肉组织等۰鱼类精子;植物:种子的胚中都含有丰富的DNA。微生物:谷氨酸菌体含7%~10%,面包酵母含4%,啤酒酵母含6%,大肠肝菌含9%~10%(培养过夜)。Note:从各种材料中提取DNA方法不同,分离提取的难易程度也不同。 对于低等生物。如从病毒中提取DNA比较容易,多数病毒DNA分子量较小,提取时易保持其结构完整性。 从高等动植物中提取DNA难度大一些。因分子量较大,易被机械张力剪断。莽消殆薛铲洛平杯积走铭冕框赫荫戊蜂意殉值敞校檬桓氧碗涡猎篇欠嘶烦第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测破碎细胞(来源-方法)微生物:溶菌酶、SDS裂解。高等植物:捣碎器破碎、液氮研磨。酶法:蛋白酶,如胰蛋白酶,冰冻法:反复冻融或液氮冻后组织捣碎。动物:液氮处理后用匀浆器破碎。细胞器DNA:首先纯化细胞器。以上处理时均要同时加入核酸酶抑制剂掇蓬谅哗伴绕堤跟恰帖迭编壕村孺彭于绎铀形容稀豫阔咱舍贫渤闰片怪禄第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测