文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
BMP-2基因给药促进骨再生的实验研究
姓名:朱六龙
申请学位级别:博士
专业:外科学(骨科)
指导教师:戴尅戎

英文缩写一览表乙二胺四乙酸感染倍率碱性磷酸酶磷酸盐缓冲液达尔百克氏改良伊格尔培养基胎牛血清腺病毒介导的人基因痓’腺病毒介导的肴樘擒彰富ǜ牧家粮穸嘌骨形态发生蛋白间充质干细胞Ⅱ甴,,嗣匮抖大掌博士掌位论文:其文竹翔一览毫猤痵
:骨髓来源的问充质干细胞是成骨细胞的祖细胞,其成骨性分化需要生长因子的刺激。在各种生长因子中,骨形态发生蛋白潜谎芯孔疃嗟囊焕嗄苡盏汲晒窍赴只⒋俳窃生的生长因子。外源性捎诎胨テ诮隙桃约按瓷瞬课痪植炕肪车成本高等不足。本研究的基本原理是将编码的基因,通过腺病毒介导转染后植入骨缺损部位,在机体内持续而有效地表达包括人基因—转染的同系大鼠对大鼠股骨干节段性骨缺损的修复效果、基因转染的入骨髓间充质干细胞的诱导成骨能力闶笠煳怀晒和基因转染的同种异体问充质从大鼠骨髓中分离培养,分为椋随机分为椋孔唬捎玫ゲ喙晒歉彼鹉P停直鹬入下列细胞与胶原的复合物:。一H镜慕懦渲矢上赴干扰,为获得生理效应,需要大剂量、重复使用,且存在毒性反应、,并以自分泌和旁分泌的方式诱导骨再生。本论文报告的范围干细胞对大鼠股骨干节段性骨缺损的修复效果。材料和方法:的实验研究染细胞组;—转染细胞组;醋H鞠赴椤7直鹩谔旧ā定量测定。只雄性大鼠—转染的间充质干细胞;醋H鞠赴S谑鹾、周行放射学检查,。.一外行蚔第﨓掌博±学位靛模褐形曩·
,与其它两组差别有显著性.—.H镜未愈合,放射学评分低于猦转染组,差异有统计学意义瓸,蜃H救斯撬杓涑渲矢上赴盏家煳怀晒堑氖笛楣转染细胞组;.转染细胞组;醋H鞠赴椤7直鹩量测定,并杼裸鼠肌内诱导成骨试验以评价腺病毒介导的人基只雄性近交系大鼠随机分为椋孔只,采用单侧股骨干彼鹉P停直鹬踩耄和迪赴┨逦狥幌荡笫染的洲充质干细胞,,未用S谑鹾、、苄蟹派溲Ъ觳椤J鹾周的标本行组织学检查及组织形态计量学分逋馐匝榻峁允荆珹—一H镜拇笫驧转染后第大鼠谔逋馀嘌旌蟪鱿指平峤冢鳤—转染组和未转染组未见。动物实验结果:放射学检查显示,,分为三组:试验、蚔旧ā定因—转染人骨髓问质干细胞的诱导成骨能力。蜃H镜耐忠焯寰绯渲矢上赴薷创笫蠊晒侨彼—一H镜募涑渲矢上赴狟H镜腎瑚充同种异体细胞,供体为大鼠..细胞,未用狟H镜募涑渲矢上赴τ肍;天旧ǘ辔Q粜裕珹一H咀楹臀醋H咀锳染色阳性细胞少见。猦转染的大鼠钚缘天开始升高,植入术后苡忻飨怨丘栊纬桑鹾周例骨缺损中的例愈合,体外行质干细胞;察析。结果:—第娇芧掌博±掌∞镕文:中靡
系问充质干细胞组和猦转染的同种异体问充质干细胞应用的人于体外培养于天后出现钙结节,而甮H咀楹臀用组、猦转染的同种异体间充质干细胞未用例中的侨彼鹩希组械例骨缺损愈合;放射学评明显骨痂,缺损未愈合。术后茏橹Ъ觳椋珹—.H镜耐有丰富的编织骨和板层骨,其它槲廾飨怨丘杌蚪鲇猩倭抗切纬桑生物力学测试显示猦转染组败骨缺损区新骨的弯曲强度是对侧未手术股骨的%±均数±标准差籄—一H咀猦转染的人出现蛋白条带;转染后第霢染色多数细胞为阳性,狟H咀楹臀醋H咀锳染色阳性细胞达高峰,—,H组组有明显骨痂形成,、狟H镜耐忠焯逦食渲矢上赴τ肍组和猤H镜耐忠焯邈壮渲矢上赴从肍组术后各时点均无橐园宀愎俏V鳎珹—一H镜耐忠焯寮涑渲矢上赴用橐员嘀呛屠喙侵饰V鳎谟醒字⑾赴蟆狟染的同系和同种异体间充质干细胞组无明显新骨形成,缺损区内为纤术后周放射学和组织学检查均提示骨痂改建接近完成。逋馐匝榻峁允荆琖少见;琱转染的人钚缘天丌始升高,天转染的人未见。放射学和组织学检查均提示,裸鼠肌内注射甴转染的人悬液术后芫幸煳怀晒牵转染细胞组未见明显成骨,未转染细胞组仅有少量骨形成。派溲Ъ觳橄允荆踩胧鹾周,猦转染的同系问充质干细胞组..H镜耐忠焯錰刚充质干细胞应统计学差异;术后埽组械例骨缺损愈合,第维结缔组织。组织形态计量学分析显示,术后蹵—。H试验可见,上海第芽芧掌士镕菏畑瓸
瓵—基因转染的同种异体大鼠阃充质干细胞移植可诱基因转染的人间充质干细胞在体外培养时钚栽龈撸尚纬煽蠡唐谛〖亮坑τ肍后,可抑制甴基因转染的质干细胞移植可诱发免疫排斥反应,但短期小剂量应用螅骨形态发生蛋白阳渲视谙