文档介绍：血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分,负责血液中O2和CO2的运输。在本课题中,我们将以血红蛋白为实验材抖,学****蛋白质提取和分离的一些基本技术。蛋白质分离和提取的原理:根据蛋白质各种特性的差异,如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等等,可以用来分离不同种类的蛋白质。一、血红蛋白的提取和分离一、基础知识(一)凝胶色谱法(分配色谱法)根据的大小分离蛋白质的有效方法。凝胶是一些微小的多孔球体,由多糖类化合物(如葡聚糖、琼脂糖等)构成。相对分子质量原理:当不同的蛋白质通过凝胶时相对分子质量较小相对分子质量较大凝胶内部的通道容易进入无法进入凝胶内部的通道只能在凝胶外部移动路程较长移动速度较慢路程较短移动速度较快相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。(二)缓冲溶液在一定的范围内,能够抵制外界的酸或碱对溶液pH的影响,维持pH基本不变的混合溶液。能够抵制外界的酸或碱的对溶液的pH值的影响,维持pH基本不变。通常由1~2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲液。利用缓冲液模拟细胞内的PH环境,保持体外溶液的pH与体内环境的pH基本一致。:::::带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。:①许多重要的生物大分子,如多肽、核酸等都具有可解离的基团,在一定的pH下,这些基团会带上正电或负电。②在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小,形状的不同使带电分子产生不同的迁移速度,从而实现样品中各种分子的分离。:琼脂糖凝胶电泳聚丙烯酰***凝胶电泳(三)电泳阳极(+)阴极(—)带正电的离子带负电的离子电泳原理示意图1、在测定蛋白质分子量时常用十二烷基硫酸(SDS)—聚丙烯酰***凝胶电泳。聚丙烯酰***凝胶是由单体丙烯酰***和交联剂N,N’-亚***双丙烯酰***在引发剂和催化剂的作用下聚合交联成的具有三维网状结构的凝胶。聚丙烯酰***凝胶电泳蛋白质在聚丙烯酰***凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。3.(SDS的作用)为了消除净电荷对迁移率的影响。: