文档介绍：东南大学
硕士学位论文
Endostatin基因转导人脐带血CD34+造血干细胞的实验研究
姓名:胡洁
申请学位级别:硕士
专业:内科学(肿瘤学)
指导教师:姜藻;陈宝安
20040524
基因转导人脐带血煅8上赴氖笛檠芯东南大学附属中大医院肿瘤科研究生胡洁导师姜藻【摘要】目的将人血管内皮抑制素转导人脐带血煅8上赴蠓治銎浔泶锖分泌情况。方法利刚逆转录病毒鲈靥澹玴—重组质粒转化蛉顺Ω寺保用氨苄青霉素猩秆。〖亮颗嘌┰觯眉盍呀夥ㄍ斟恚℉平¨烈酶切鉴定。用电击穿孔法刈橹柿—转导包装细胞州【猩秆』竦米5汲晒Φ腜细胞并进行培养,提取病毒上清并;检测浓度。取新鲜人脐带血~~步分离出煅8上赴=ú《旧锨逵肴似甏狢造血干细胞共培养小时。麻州觳馊薊谄甏T煅8上赴械淖5肌⒈泶锖头置凇结果玡柿T贒顺Ω司锌寺±┰龊螅盖屑ㄓ衑存在。流式细胞仪觳猓珻干细胞在脐血中的初始含餐%。经一姒分离纯化,纯度超过%。从的界面细胞,平均可以分离获得~篎细胞。泊┛捉导重组基因转导人脐带血煅8上赴鳎璓证实,转导基闻的人脐带【煅G赴蜃橹写嬖谟人特异性片段,治鍪救在转导细胞中获得稳定表达和分泌。结论绱┛卓捎行У亟榈贾刈榛虻淖H荆5夹矢撸踩薷弊饔茫僮骷虻ァ甈细胞能有效地为逆转录病毒提供包装蛋白,使之成为完挫的病毒颗粒,并能用对转导的包装细胞进行筛选。刈槟孀B疾《镜味却以上,能有效感染靶细胞,《旧舷感染厉,痚赴芨弑泶飁颍铣蒭鞍住J淙隒/细胞可能是~。【关键词】逆转录病毒科,,,向管内皮抑制素电穿孔论文摘要
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研究生签名:址导师签名:至红日期:业。。研究生签名:置匮日期:超生五东南大学学位论文独创性声明东南大学学位论文使用授权声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外,允许论文被查阅和借阅,可以公布ǹ论文的全部或部分内容。论文的公布ǹ授权东南大学研究生院办理。
主要缩略词表内皮抑制素含有人内抑素的柿血管内皮生艮冈于删基质金属蚩酶碱性成纤维细胞生衒血管内皮生宰脐血单个核细胞煅8桑嫦赴基质金属蛋白酶血管内皮细胞瘤踊血管抑索非何杰金淋巴瘤流式细胞仪肾细胞癌自介素一白介素一干细胞因子转/每分移植物抗宿主病胎牛血清多药耐药火肠杆菌人脐静脉内皮细胞自由荧光强度人肺微血管内皮细胞磷酯酰丝氨酸缩略词痚痚疕痯一
前言离到一种新的,具有特异抑制血管内皮细胞生艮的抑制网子。欢霭被嵝蛄胁舛ń实体瘤的生长与转移离不开肿瘤血管的生成。当肿瘤生长超过、细胞达亢缶捅匦依赖肿瘤组织中的新生血管形成来提供生艮所必需的养分。如果肿瘤超过这样的体积还缺乏毛细血管和小血管的生成,肿瘤将发生退化,””。如果抑制肿瘤新生血管的生成,肿瘤细胞则因缺血缺氧而部分坏死,可抑制肿瘤的生长””’。因此,抑制血管生成可能是抑制肿瘤生长、防肿瘤转移的一种有效策略””。血管内皮细胞来源丁原有组织血管内皮细胞的分裂增殖,因此,”““。内抑素是年痩5燃甏有∈驦肺癌细胞中分离山具有肿瘤血管内皮细胞生种谱饔玫腶后,义一次从小鼠血管内皮细胞瘤中分果表明该物质为胶原鳦末端水解片断”“,是一种强效的新生血管抑制剂,在小鼠中对肿瘤诱导的血管生成具有几乎完全的抑制作用,显示很强的抗肿瘤活性。目前人体血管内抑索基因已克隆出米,但重组的内抑索需经过再折盏才具有水溶性,而自然折叠率很低,%的重组内抑素会以沉淀的形式丢失,冈而限制了它的临床应。”“笱通过基闳痰姆椒ㄖっ髟谥琢鱿赴兄苯哟ǖ菽谝炙鼗蛞材苡行У匾种浦琢龅纳び胱R啤K枪菇能分泌—猰—芎系鞍椎腞小鼠肾癌细胞和私岢Π┫赴5继澹体内外实验中证实有—猰—芎系鞍椎姆置凇W5继逯琢鱿赴纬傻闹琢鲇攵哉组相比要小—%,即使接种混有%转导体肿瘤细胞和%:照组细胞所得结果与接种サ淖导体细胞相一致。现有资料表明,人类造血干细胞是良好的基因转移靶细胞。具有多种分化潜能的造血干细胞分化增殖能力强,可向不同的细胞系分化,因此