文档介绍：中国协和医科大学
硕士学位论文
FHIT基因在人肺癌变过程中作用的研究
姓名:方健
申请学位级别:硕士
专业:肿瘤学(基础)
指导教师:高燕宁
20030601
摘要肺癌是一种严重威胁人类健康的恶性疾患。在中国,肺癌的发病率和死亡率在所有恶性肿瘤之中上升最为迅速。湃旧宥瘫娜笔欠沃馨┍涔讨衅毡存在的早期事件,提示在这个区域存在一个或多个抑癌基因。来探索该基因在人肺癌变过程中可能发挥的作用。,包括细胞增殖能力、细胞周期和细胞凋亡。结果发现,转染空载体的对照/.赴与亲本细胞啾龋に俣任廾飨圆钜欤鳼疐赴纳に俣仍明显慢于前两者,提示蛋白的高表达有抑制细胞的体外生长的作用。采用流式细胞仪进行的细胞周期分析显示,/细胞期陌俜趾渴荵/.细胞的倍,提示/细胞发生了/谧柚停籛分析发现的蛋白表达水平的下调可能是期细胞含量增加的机制之一。用初步分析。经杂交,在/及其对照细胞之间发现了一批差别表达煌ü齊云渲胁糠只蜃隽朔浅3醪降难橹ぃ砻靼樗鍲鞍赘表达,虮泶锷系鳎鳫基因表达下调,<诤椭掳┪锉┞断喙氐闹琢鋈绶癌、乳腺癌、宫颈癌、头颈肿瘤及消化道肿瘤等。有资料显示,基因的异常改变早在肺支气管癌前病变阶段已经发生:在肺癌组织中,蛋白有较高的表达缺失。在这项工作中,我们以一个处于癌前阶段的、不表达内源性基因的人支气管上皮细胞系为研究材料,通过分析导入外源性对细胞生物学行为的影响,内源性蛋白的永生化人支气管上皮细胞,获得了稳定高表达蛋白的细胞械南胞凋亡检测则表明:/细胞的早期凋亡高于/./。和ァ基因在人肺癌变过程中作用的研究
生一定瀚影确。蛋自质缬痉治龉蟹⑾至艘慌畋妆泶锏牡白灾实悖云渲幸徊糠蒺异明摄的点进行了质谱鉴定醪降腤验证表明,传睫蛋叁毫表达鞍妆泶锷系鳎。上述研究结采掇示,外源往蘩困的离表达可以显藩抑制细胞的体外生长,恧这秽增殖掇铡作用是逶:竦骺赜缺笃诤陀鹊蛲隼词佃ū!Mü齝和蛋白质缬镜雀咄考际醵訷疐赴B甲楹偷鞍字首楦谋涞初步探索所获得的一魑差异表达基因及鬣白,剐为迸一步研究基因在入肺癌变过稷孛鲍终月提供了重要线索。鞍妆泶锵碌鳌基因在装┍涔特门跞嘲暄芯一!
甌登坚董墼垄△壁銎錾堇翟曼堡曼塑黧茎閏琲剩琲/,妇,,/甀琤/.甌甀,.琧,/。瑆瑃/.籱。,琣。。///一
.。/。//瑃赫因在人肺癌变过程中作用的研究瓺,。—.瑆瓺,,琱;.一
礤狂基因与肿瘤鞍字仕饷富钚陨ナЫǖ贾翧。∈茿类似物,能挪制蛋囱激酶的活性。因此编码的蛋螽质并无砖水解簿活文献综述翠在年,鹊宸⑾忠患易逋茇悍ⅰ⑺ú唷⒍嘣畋I鲥嗝饔О┯雝:染色体荔往有关。诧看,奁食篱癌、胃癌、结麟癌、胰腺瘘、头颈癌、抉⒐逶ヰ等多羊中肿瘤中观察到染色体的高频率缺失,提示在上可能存在季牵癌蒺困。·琗为疏水往氨基酸峁褂虻腍蛋白质家族高度同源,又因为此基因跨越脆性位点熄之禽名为一、﹖:易位断裂处及脆性位点嵋桓鋈巳橥肥萑扯的捶入位点,全长超过R桓度保守静基嚣序捌。其全长约,包含个辨显予,文筹ο宰隅事~,#’,籶琾籺,催化水姆为鉊零平舞蘸,缴呋嵩銮课偕ば藕诺宕ǖ迹褂Π竞痴⊥揪惰蛲鲇龅溃佣痰致肿瘤发生。勇外,蛋白矮有去除籀类戳物黪作用,英脱耀功能戆丧失也性,却同样能抑制肿瘤细胞在裸鼠体内的成瘤作用。因此有入认为蛋岛质每其底镌结合抑制肿瘤的产生可能比其水解酶活性更为羹要。扔貌钜煜允痉治鎏秸牒屯庹沼璨痘穹ǔ蛉范艘桓鲂碌妮戮簦蛋自家族中的一员辑,可能引起肿瘤的发生。然而突交型年,
及诱导的凋亡——因为细胞凋亡在转染旌蟪鱿郑天达到峰值;而蜃饔没萍笆Щ罨疲基因的作用机制⒌,其序列与人泛素结合酶完全相同。它的羧基端与蛋白结合酶隨期及谙赴芷诘鞍椎慕到庥泄兀訤鞍卓赡芡ü核亟岷厦⒂盏枷赴蛲确⑾郑谌笔谠碏鞍妆泶锏姆伟┫赴礖凶H隖蚝螅导致其致瘤性的逆转:在筛选出的稳定克隆中,发现了明显的狭哑巍A魇较细胞仅为%。转染基因后的细胞的鞍姿奖榷哉赵黾恿肆奖叮欢墓鄣恪M保腔怪赋觯現盏嫉牡蛲霾煌趐等将基因导入鍪