文档介绍：南华大学
硕士学位论文
hDaxx在真核细胞中表达及其在巨噬细胞中的功能研究
姓名:刘安元
申请学位级别:硕士
专业:病原生物学
指导教师:谭立志
20030501
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谡婧讼赴斜泶锛捌湓诰奘上赴械墓δ苎芯中文摘要目的:构建甴融合蛋白真核表达载体痟,研究谡方法:结果:强寺∪胝婧讼赴泶镌靥錺,筛选、鉴定阳性克隆得猦融合蛋白表达载体痟。分别将质粒转染细胞、巨噬细胞,利用荧光显微镜、测定甴融合蛋白在真核细胞中的表达与定位。显微计数法测定词备弑泶锒缘厝姿捎盏嫉木奘上赴蛲龅挠跋臁分别用盖兄刈樘錺/螅碇堑缬究煞直鸺大小为和的片段,说明强寺∪,痟分别转染细胞、巨噬细胞后,荧光显微镜下见到甴融合蛋白分别在细胞、巨噬细胞成功表达并定位于细胞核,而ㄎ挥用慈鍪奔浯碳ぞ奘上赴琓果进行方差分析,:刘安元指导教师:谭立志教授核细胞中的表达与定位及其即时高表达对罨木奘上赴赴蜃臃置诩暗塞米松诱导的巨噬细胞凋亡的影响,为探讨诰奘上赴械墓δ芗白饔没制提供实验依据。ú舛╤即时高表达对盏季奘上赴置谙赴蜃覶—的影响。即诤系鞍妆泶镌靥錺/菇ǔ晒ΑS胮及细胞质。〖。分泌量用ú,而哉兆橛雙对照组无显著性差异南华大学硕士学位论文刘安元
结论:.砻鱈可活化巨噬细胞分泌细胞因子,且词备弑泶锟梢塞米松能离效诱导巨噬细胞凋亡,且词备弑泶锏贾碌厝姿捎盏嫉木奘词备弑泶镆种频厝姿捎盏嫉木奘上赴蛲觥关键词;。从形态学检测地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡并计算凋亡率,方差分析显示,空白对照组与地塞米松对照组及哉兆橛邢灾圆钜,实验组相对于哉兆榧暗厝姿啥哉兆榈蛲雎拭飨越档,且此差异不受时间差别的影响,而地塞米松对照组与哉兆槲尴灾圆钜,表明地细胞凋亡率明显降低。成功构建了甴融合蛋白表达载体痟,猦融合蛋白分别在细胞、巨噬细胞表达并定位于细胞核,且猦融合蛋白不影响奶匾煨浴词备弑泶锵碌鱈刺激的巨噬细胞分泌。细胞因子,
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言引中,可抑制凋亡调控蛋白鏕瓹谋泶锒瓒掀涞蛲鲫貲箍蛋白质⒉挥隤直接作用,可能作为转接子介导多种这样的和南嗷プ饔玫然贫种艱榈嫉牡蛲觥尽】。与病毒感染关系密切,是位于细胞核内的一种新型调控蛋白,亦是一种岷系鞍祝朐幼粒细胞白血病蛋白嗷プ饔霉捕ㄎ籔癌基因结构域。最初是在疐盏嫉南赴蛲鲋凶魑5蛲鲈銮恳蜃佣环⑾值模蟠親细胞文库中褥到证实。劳鲇笵可活化凋亡信号调控激酶,能够将从核内募集到胞浆,【縪进一步研究表明,·主要位于细胞核内作为一种转录调控因子而发挥功能。与经小泛索相关修饰降时,聚集到致密性染色质,此时可与一些转录因子如、等相互作用而抑制其靶基因的转录活化T谑笈咛シ⒂讨校珼捎胱萄细胞中的调控蛋白相互作用,调节胚胎发育、分化【俊荁细胞发育的重要调节因子,【习。定位于的某些蛋白质如昂诵√宸肿恿课蛋白质进出T诳笴タ寺】固逵盏嫉乃柙葱韵赴礣赴牡蛲通过鹘赥诱导的鼠肝细胞凋亡,同时,ü瓒螪階许多病毒蛋白与相互作用,调节病毒在细胞内的转录、复制和增殖,这种相互作用亦可打破结构,从而改变等组成蛋白在细胞中的定位及功能【.’掘删。综上所述,是细胞内转录调控及信号传导网络中的重要成分,它通过蛋自与蛋白相互作用参与许多细胞内的生理和病理过程,并且在不同的调节网络中具有不同的功能,研究不同细胞中的的转录调节作用对于进一步了解的生理功能具有重要意义。子修饰后的嗷プ饔霉捕ㄎ籔H狈或肯巨噬细胞作为免疫调节和效应细胞,通过吞噬杀灭微生物、抗原提呈和分泌南华大学硕士学位论文刘安元
多种细胞因子等调控机体炎症反应和免疫应答等。静止状态的巨噬细胞受某些因素缦妇嗵恰瑈等碳ず螅ü赴谛藕糯ǖ迹鹦矶嗟鞍酌负胞因子分泌增加等。巨噬细胞与细胞凋亡关系密切,它既是凋亡细胞的主要清除者,自身也通过凋亡实现其生物学意义:①机体每天产生约鼍奘上赴时