文档介绍：东南大学
硕士学位论文
HLA四聚体复合物检测系统的构建及初步鉴定
姓名:郭薇
申请学位级别:硕士
专业:病原生物学
指导教师:张建琼
20040610
木厶甯春衔锛觳庀低车墓菇及初步鉴定东南大学医学院病原与微生物学系研究生:郭薇导师:张建琼教授中文摘要一、猄结合测序分析快速筛选亚等位基因二、可溶性四聚体复合物的构建苣ā!了筛选特定等位基因——獳术的方法,同时也为快速检测其它特定任换传统的鉴定方法费时费力,敏感性低,近年来出现了一种新的检测方法,即可溶性成功建立相对简单经济的检测狝任换虻姆椒ǎ梦坏闾匾煨砸进行次┰觯岷螾产物测序即可快速筛选狝粜缘母鎏澹我们所构建的狝砦浑乃木鄹春衔锛觳庀低辰徊绞笛榈男枰!1狙芯坎唤龃唇提供了经济实用的模式,具有较高的实际应用和参考价值。两个亚单位亓础⑶崃后,将可生物素化的序列械鞍状炕诙訦~分子高亲和力的—癌胚抗原优势复合物。以酶作用于复合物中的融合于亓吹鞍證端械睦蛋彼岵谢生物酰化该复合物。生物酰化的母春衔镉朐搴斓鞍昙堑那缀退匾:结合,形成均一的四聚体结构。利用—觳獾缴锼鼗达到%以上,同时间接笛橹な盗丝扇苄訦—一木厶逯懈鞯ヌ甯春咸宓抗原特异性细胞毒性馨拖赴呙绲幕 6糠治隹构颂匾煨訲细胞能为免疫应答的发生过程提供重要的信息。肽四聚体方法。实验表明,该方法克服已有检测手段的缺点和局限性,这种四价的重组分子在体外可有效标记赴乖侗鹗芴,并适用于流式细胞仪检测,由于该技术应用原核表达重组蛋白,其来源容易,仪需一目乖木涂芍票钢刈榉至耍因此近期得到了广泛应用。本实验旨在国内率先建立可溶性狝籆四聚体检测系统,为肿瘤的细胞免疫机制研究提供一个方便、准确的研究平台。研究内容如下:在成功地扩增了连接到狝亓窗馇┒耍直鸸菇ǔ煽扇苄灾刈榉肿樱性吮泶铩T倮赴砦欢嚯腉嬖谙拢咛逋庹鄣删哂型暾瓜蟮腍—一至活性,初步完成了可溶性狝籆四聚体的结构及功能的鉴定工作=徊窖芯肿瘤细胞免疫功能奠定了良好的基础。关键词:中停篜—翰庑颍嚎扇苄运木厶珻的鉴定是研究×.
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研究生签名:——日日期:——东南大学学位论文独创性声明东南大学学位论文使用授权声明期:研究生签名:导师签名:的研究成果,也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我⋯同工作的同志对本研究所做的任何负献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外,允许论文被套阅和借阅,可以公布本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导械难芯抗ぷ骷叭〉玫难芯砍晒尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过刊登畚牡娜ú炕虿糠帜谌荨B畚牡墓ú包括刊登谌ǘ洗笱а芯可喊炖怼
淼署暴≯附一监一符号、变量、缩略词等本论文专用术语的注释表缩写词英文中人类白细胞抗原⑶虻鞍赴挂苁侗鹗芴逆转录碱犟对值:酸碱度氢离子指溴化乙锭撼逡磷酸缓冲盐溶液酶联免疫吸附测定辣根过氧化物酶三羟甲基氢基甲烷网甲基乙二胺二硫苏糖醇变性聚丙烯酰胺凝胶电异丙基硫代一日一肴糖苷培养基高效反卡日液相色谱分析藻红蛋白标记链亲和素虹琋’,W橹痩珥容性复合体细胞毒性赴互补脱氧核糖核酸信使数焦碳酸二乙酯组氨酸光密度聚乙二醇乙二胺四己酸牛血精白蛋白泳仪苯甲基磺酰氟酶作用底物肽中Ⅵ符号、变量、缩略词等奉论立弩用术语的沣释衰狿—瓸——
前言型蛐偷奶匾霤觳狻虼嗽诤艽蟪潭壬舷拗屏烁疤ü浔砻媸芴錞识别并结合感染细胞表面』狪类分子肽复合依赖一定时间的肽诱导以产生,由于只有一部分细胞可产生某种,故此法仍低估了总的抗原特异性牧俊的聚合酶链反应是一种基于际醯姆椒ǎ涿舾行愿但是只能应用于已知方法的应用。检赴从Φ睦硐敕椒ǎ弑敢韵录父鎏跫足够的敏感性、特异性、可靠性和可重复性;芗霳赴诨迥诨罨刺碌恼媸登榭觯恢产生明显偏差;僮骷虻パ杆佟⑿枰5谋瓯玖可佟K匝扒笠恢旨虮憧尚校旨婢很低,且解离快,无法用免疫荧光法标记特异性肿印6嗉鄯肿涌捎胍桓鎏匾煨訲细胞上的多个岷希哂邢喽越细叩那缀土ΑR虼私柚锼厍缀退丶读7糯笤构建可溶性四聚体分子。该四聚体分子的构建是通过在可溶性喾钟璧闹亓无穿膜区和胞浆区┪布由弦欢慰缮锼鼗蛄校谙妇斜泶镏刈榈鞍缀螅纯稍谔逋饨行生物素化。由于一分子链亲和素可结合四分子生物素,因此加入合适比例的链亲和素分子,并适用于流式细胞仪检测特异性赴琸汀康扔τ肏特异的抗原细胞介导的免疫应答】,在机体抗感染免疫、抗肿瘤免疫、移植排斥反应和自身免疫病中发挥重要的作用⋯。闹饕Pвο赴晃O窲也播中起决定性作用,目前