文档介绍：河北医科大学
博士学位论文
HPV16E7DNA疫苗和IL-15重组质粒的联合免疫作用及对树突状细
胞表面分子的表达和功能的影响
姓名:李艳佳
申请学位级别:博士
专业:病理学与病理生理学
指导教师:齐凤英
20050401
中文摘要
疫苗和重组质粒的联合免疫作用及对树
突状细胞表面分子的表达和功能的影响
摘要
人乳头瘤病毒感染人的皮肤和粘膜上
皮细胞,与上皮细胞的良睦与恶性增生密切相关。的一些亚型可以
引起皮肤疵、尖锐湿优等良比增生性病变而另一些亚型可以引起宫颈癌
及其它生殖器肿瘤、皮肤肿瘤、口腔肿瘤等。由于缺乏特异的有效治疗手
段,感染严重影响人类的健康,因此急需研制安全有效的疫苗。
目前尚不能在体外大量培养,难以研制传统疫苗。基因疫苗具有制备简单、
免疫应答持久、安全稳定、可反复使用等优点,是一种有前途的新型疫苗。
的早期蛋白基因是基因疫苗的理想靶抗原,研究表明
疫苗可以诱导动物产生特异性细胞免疫应答和体液免疫应答,保护小鼠不
受阳性肿瘤细胞的攻击,并且能抑制己经形成的肿瘤的生长甚至
使肿瘤消退。但是当该疫苗应用于灵长目动物时,其免疫原性降低在人
体中应用该疫苗,其诱发的免疫应答更为减弱。而疫苗最终要应用于人体,
因此必须进一步提高疫苗的免疫原性。研究发现某些细胞因子基因与基因
疫苗共同注射, 可以提高基因疫苗的免疫效果。白细胞介素
为一种最近发现的细胞因子,可以共享白细胞介
素一的受体和活性,例如激活细胞,特别是
。除了具有活性外,它还在细胞的活化和其功能的调
控中起关键作用。基因已经在一些实验中被用作基因疫苗佐剂,取
得了良好的促进抗原特异性免疫应答的效果。但是至今尚未见到联
合基因疫苗诱导免疫反应的报道,因此本实验构建了
基因疫苗及亚克隆了基因并构建了其真核表达质粒,将表达
质粒与基因疫苗共同注射于小鼠,并观察其对小鼠的
特异性细胞免疫应答的影响。
树突状细胞是体内功能最强的抗原递呈细胞,高表
达和共刺激分子,是当今免疫学研究的热点之一。目前
对于抗肿瘤免疫治疗的研究表明,可激活抗原特异性细胞免疫
中文摘要
反应,尤其在相关肿瘤的研究中应用多肤、病毒样颗粒和病毒基因作
为抗原促使成熟诱导抗肿瘤作用。最近临床治疗试验研究也显示
可能是相关宫颈癌的有效治疗方法。总之,许多资料都支持
作为一种抗癌治疗手段是很有前途的。为了进一步提高抗免疫治疗
效果,我们还将基因和共同修饰探讨和
联合作用于所诱导的细胞免疫效应,这在国内外尚未见报道。
重组质粒和重组质粒的构建
目的基因在宫颈癌细胞中持续地表达被认为是相关
肿瘤治疗的理想的靶点。因此,本研究选用基因为免疫原和
为佐剂,设计了联合免疫实验。我们构建了重组质粒和
重组质粒,为后续实验重组质粒与疫苗联合
免疫小鼠打下了物质基础。目前将这两者联合应用的研究尚未见报道。
方法根据中序列,用引物设计软件
设计了的特异性引物以全长为模
板,加入特异性引物,扩增靶片断用
双酶切和以下简称,以
胶回收试剂盒回收酶切产物在连接酶的作用下将
与连接, 构建成真核表达质粒
以下简称将同样用
酶切后以胶回收试剂盒回收酶切产物,再在
连接酶的作用下与连接,构建成以下简
称将连接产物转化感受态大肠杆菌,在培养基
中过夜培养,小量提取质粒,经双酶切鉴定连接产物,选
择阳性克隆进行质粒大量提取并纯化,测和。进行定量和纯度
检测。各种质粒用生理盐水稀释至所需浓度,℃保存。
结果重组质粒经酶切得到的基因片段与目的基因片
段理论值大小相等构建的重组质粒经酶切得到的基
因片段,与酶切得到的基因片段大小相等。
重组质粒增强疫苗诱导小鼠的免疫功能的实验
研究
目的是一种新型的细胞因子,具有广泛的生物学活性。
中文摘要
能增强细胞的细胞毒活性,刺激细胞产生细胞因子。作为
基因疫苗的佐剂多被应用于基因疫苗的研究中,证实基因是
一种优良的基因疫苗的细胞因子佐剂。目前还没有见到有关
基因对基因疫苗免疫应答影响的报道,因此本实验真核表达
质粒与基因疫苗共同注射与小鼠,观察了其对小鼠的
细胞免疫应答的影响。
方法动物免疫雌性小鼠,随机分为组,分别肌肉注射
接种和讨。每
只混合接种组每种质粒各。接种前以高渗蔗糖溶液
预处理接种部位。周后以同样剂量加强免疫,共加强免疫次。
末次免疫周后取外周血并分离血清,双抗夹心法测
法做淋巴细胞增殖实验,流式细胞仪检测脾细胞及外周细胞
亚群。
结果经和组免疫小鼠的血清中可以