微生物检测菌落总数测定方法.doc

文档介绍：微生物检测菌落总数测定方法方案一微生物学检验菌落总数的测定1原理微生物活体数量的测定方法,常用平板培养计数法。它是通过将样品制成均匀的一系列不同稀释度的稀释液,再取一定的稀释液接种,使其均匀分布于培养皿中特定的培养基内,最后根据在平板上长出的菌落数计算出每克(或mL)样品中的活菌数量。:36??1?。:2,5?。。。。。。:。:φ90mm。,500ml。(量程分别为:0,1000μl,0,100μl,0,10μl)及吸头。。。。。,镊子。。。。。3检验程序菌落总数的检验程序见下图。检样10g样品+90mL无菌生理水,均质?10倍系列稀释?选择至少3个适宜样品稀释均液方法???方法?各取1mL分别加入无菌培养皿中,在培养皿中加入15mL~20mL平板计数每皿中加入15mL~20mL平板计数琼脂培养基,凝固。然后在每皿中加入琼脂培养基,混匀,凝固。,涂布均匀。??在36??1?倒置培养24,48小时?计算各平板菌落数?(pl)培养基(最常用)胰蛋白胨,(,,酵母浸膏,(,,葡萄糖,(,,琼脂,,(,,,,煮沸溶解,调节pH值,分装锥形瓶中,121?高压灭菌15分钟。:,121?高压灭菌15分钟。:,样品置盛有225,,生理盐水的无菌均质杯内,8000,,min,10000,,-1-2-3-4-5-6-7-8-9min均质,min,,min。制成10,10,10,10,10,10,10,10,10稀释液。-6-,选择3~4个适宜稀释度的样品均液(比如10,10,-8-910,10稀释液)。:用1mL微量移液器吸取不同稀释度的菌悬液1mL于一个无菌培养皿中(每个稀释度做三个重复),再在培养皿中分别倒入10,15mL已融化并冷却至45~50?的培养基,盖好平皿盖子,趁热轻轻转动培养皿,使菌液与培养基充分混合均匀,冷凝后在恒温培养箱中倒置培养24,,,,,培养温度为36??1?。同时以稀释液无菌生理盐水作空白对照。-8-9-10注:比如1000亿CFU样品稀释梯度可选择为:10,10,10。接种方法2:,,稀释液均液于计数培养基平板上,将稀释液涂布均匀,吸附,在恒温培养箱中倒置培养24,28,,培养温度为36??1?。同时以无菌生理盐水作空白对照。()-7-8-9注:比如1000亿CFU样品稀释梯度可选择为:10,10,10。,.3菌落计数可用肉眼观察,必要时借用放大镜或菌落计数器,以防遗漏。记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(col